2016 Fiscal Year Research-status Report
心血管イベントの予測因子としての脂質代謝酵素動態の解明
| Project/Area Number |
15K08627
|
|---|
| Research Institution | Kanazawa Medical University |
|---|
Principal Investigator |
小林 淳二 金沢医科大学, 医学部, 教授 (60302577)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川尻 剛照 金沢大学, 医学系, 准教授 (90345637)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| Keywords | 肝性リパーゼ / ELISA |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、課題研究達成のために、脂質代謝酵素の一つ肝性リパーゼ(HTGL)を簡便に測定できる系を確立した。従来HTGLはヘパリン静注後血漿（PHP)を試料として測定したが、血清中HTGLを測定できればはるかに多くの試料を採取しHTGLの臨床意義を明らかにできる。
そこで血清中HTGLに反応する新しいモノクローナル抗体（MoAbマウス9A1、MoAbラット141A1）を開発し、血清HTGL蛋白量測定用ELISAシステムを確立した。方法：FLAG-epitope tagを3 '末端に付加した後、PCR産物をpcDNA3.1（+）発現ベクターに挿入した。HEK293をhHTGL plasmidでtransfectionし、安定な発現系を確立するためにG418で選択した。 得られたHTGLをBALB / cマウスまたはWisterラットに皮下注射し免疫した。MoAbの特異性を確認するために免疫沈降 - 免疫ブロッティング分析を行った。 臨床的意義を検討するため冠動脈疾患を有する42名の男性被験者の血清脂質、HTGL蛋白量測定を行い、それらの相関性を検討した。結果：MoAbマウス9A1およびMoAbラット141A1はいずれも、組換えHTGL、PHP-HTGL、血清HTGLを免疫沈降させた。このELISA法は、アッセイ内およびアッセイ間で変動係数が6％未満であり、リポ蛋白リパーゼまたは内皮リパーゼと交差反応しなかった。被験者の臨床分析では、血清HTGL濃度とPHP-HTGL濃度との間に強い正の相関があった（r = 0.727、p <0.01）。血清HTGL濃度は血清TG（r = 0.314、p <0.05）とALT（r = 0.406、p <0.01）との間に正相関を示し、LDL-C、small、dense LDLおよびγGTPと正の相関傾向を認めた。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本課題研究を達成するためにHTGL酵素蛋白量測定の系を確立することは必須である。
この系の確立により血清中のHTGL測定が可能となる。従来はHTGL測定試料としてヘパリン静注後血漿を用いたため検体採取がはるかに複雑であった。
|
| Strategy for Future Research Activity |
リポ蛋白リパーゼ（LPL)、血管内皮リパーゼ（EL)測定系はすでに確立、キット化されている、これに血清HTGL測定系が加わることになる。
今後は家族性高コレステロール血症（FH)患者から血清を採取しその動脈硬化進展度とこれら3つの脂質代謝酵素との関係解析を更に進展していく。
|
| Causes of Carryover |
LPL測定キットを購入する際、当初予定していた個数購入よりも1個（100,000円相当）少なく研究を達成できたことが大きな理由である。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
新年度開始後比較的早い時期にLPLキット購入を再開し、研究にとりかかる予定である。
|
Research Products
(19 results)
-
-
[Journal Article] Triglyceride content in remnant lipoproteins is significantly increased after food intake and is associated with plasma lipoprotein lipase2017
Author(s)
Nakajima K, Tokita Y, Sakamaki K, Shimomura Y, Kobayashi J, Kamachi K, Tanaka A, Stanhope KL, Havel PJ, Wang T, Machida T, Murakami M
-
Journal Title
Clin Chim Acta
Volume: 465
Pages: 45-52
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
-
-
-
-
-
-
[Journal Article] The majority of lipoprotein lipase in plasma is bound to remnant lipoproteins: A new definition of remnant lipoproteins2016
Author(s)
Sato K, Okajima F, Miyashita K, Imamura S, Kobayashi J, Stanhope KL, Havel PJ, Machida T, Sumino H, Murakami M, Schaefer E, Nakajima K
-
Journal Title
Clin Chim Acta
Volume: 461
Pages: 114～125
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
[Journal Article] Lipoprotein lipase does not increase significantly in the postprandial plasma2016
Author(s)
Ishiyama N, Sakamaki K, Shimomura Y, Kotani K, Tsuzaki K, Sakane N, Miyashita K, Fukamachi I, Kobayashi J, Stanhope KL, Havel PJ, Kamachi K, Tanaka A, Tokita Y, Machida T, Murakami M, Nakajima K
-
Journal Title
Clin Chim Acta
Volume: 464
Pages: 204～210
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
-
-
[Presentation] Lipase and the metabolism of triglyceride-rich lipoproteins2016
Author(s)
Kobayashi J, Miyashita K, Nakajima K
Organizer
5th International Symposium on Chylomicrons, Very Low Density Lipoproteins, and Remnant Lipoproteins
Place of Presentation
Jean Mayer USDA Human Nutrition Research Center on Aging at Tufts University（Boston, MA、米国）
Year and Date
2016-11-08 – 2016-11-09
Int'l Joint Research / Invited
-
-
-
-
-
-
-
