2015 Fiscal Year Research-status Report
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15K09005
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
山本 直樹 山口大学, 大学教育機構, 講師 (90448283)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤澤 浩一 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (00448284)
高見 太郎 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (60511251)
松本 俊彦 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (70634723)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 再生医療 / 骨髄幹細胞 / 肝線維化 / 肝臓再生 / 免疫電顕 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
全骨髄細胞投与のGFP/CCl4モデルを作成し,肝組織を浮遊切片法による高感度免疫電顕法とFEI社製の透過型電子顕微鏡Tecnai12BTと走査型電子顕微鏡Qunta3D FEG Dual Beamシステムを用いて二種類の骨髄由来肝臓修復細胞である核N/C比の高い小型細胞(EpCAM陽性・CXCR4陽性)と類円形の大型細胞(MMP9陽性)のトモグラフィーによる微細構造と３D構築による立体構造を構築し解析している。
またGFPTGマウス全骨髄細胞からMSCを分離(Veritas Easy step kit ST19771を使用),継代し,培養GFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を確立,GFP/CCl4モデルの解析protocolと同様に, 持続肝障害(CCl4)モデルにPassage1～4までのそれぞれの培養細胞群を尾静脈から投与し,肝組織を摘出, GFP/CCl4モデルでの全骨髄細胞投与の場合と比較を開始した。肝組織でのSirius Red染色での肝線維化評価では、全骨髄細胞投与の場合の方が、肝線維化抑制効果を認めた。現在、GFP陽性骨髄細胞の肝組織内の局在をそれぞれの群で解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
非培養・培養での骨髄細胞投与による肝臓組織解析・免疫電顕等による様々な抗体発現の解析等動物実験による解析がメインの研究のため、解析結果を得るのは時間はかかっているが、今後は採取したサンプル解析と更に再現性確認のため、各群を増加していく。
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| Strategy for Future Research Activity |
モデルを使用して、培養骨髄由来細胞投与と非培養全骨髄細胞投与の長所短所を確認しながら、投与細胞の特徴・相違点の解析を行っていく。またMMP9発現細胞標識トランスジェニック(MMP9/LacZ-DsRed Tg)マウスの使用したモデル作成・骨髄細胞投与の研究を急いで進めていく。
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| Causes of Carryover |
非培養・培養での骨髄細胞投与による肝臓組織解析・免疫電顕等の解析はサンプル作成に時間がかかり、またサンプルの解析結果より新たな抗体による免疫電顕等を行ったため、更に時間がかかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
肝障害・線維化モデルを使用して、培養骨髄細胞投与と非培養骨髄細胞投与のそれぞれの場合の長所・短所を確認しながら、投与細胞の特徴と相違点の解析を行っていく。
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