2016 Fiscal Year Research-status Report
ホスホリラーゼ異常リン酸化による心不全発症機序の解明
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15K09134
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
今野 哲雄 金沢大学, 医学系, 助教 (50377389)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 研至 金沢大学, 附属病院, 助教 (00422642)
小田 彰史 名城大学, 薬学部, 教授 (50433511)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | ホスホリラーゼ / リン酸化 / 肥大型心筋症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者は肥大型心筋症患者でPRKAG2遺伝子変異を同定し、この変異をマウスに導入すると筋型グリコーゲンホスホリラーゼに特異的な異常スレオニンリン酸化が生じることを見いだした。本研究の目的は、肥大型心筋症における[1] 筋型グリコーゲンホスホリラーゼ(mGP)異常スレオニンリン酸化の機能的意義を明らかにし、新規の心筋症・心不全発症機序を解明すること、[2] 異常スレオニンリン酸化を阻害する化合物を同定し、心不全治療薬創薬の木曽を築くことである。リン酸化部位のスレオニンを負電荷を持つアスパラギン酸で置換することにより、スレオニン部位が恒常的にリン酸化された擬似状態を作成可能である。一方、スレオニンのアラニンへの置換は、脱リン酸化されたスレオニンの擬似状態となる。平成28年度は、mGPの野生型および今回同定したX番スレオニンの置換変異型（Thr X Asp、Thr X Ala）のタグ融合mGP蛋白発現コンストラストを作成した。作成したコンストラクトを培養細胞にトランスフェクションさせ、WT-mGP, ThrXAla-mGP, ThrXAsp-mGPを生成した。NADPH産生量を指標にIn vitroにてmGP活性を測定したところ (Forward 反応)、ThrXAsp-mGPはWT-mGTおよびThrXAla-mGPと比較して有意にホスホリラーゼ活性が低下することが明らかとなった。この傾向は、試験管内にAMPを添加することにより更に明確となった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
海外研究協力員（脇本博子助教、Seidman教授）との連絡や連携が良好であったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成29年度はReverse反応（ゲルアッセイによるmGP活性測定系）によって変異型mGP機能を解析する。また、変異型mGPを特異的に阻害／活性化するコンパウンドのin silicoスクリーニングを行う。
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| Causes of Carryover |
研究費に相当する研究試薬購入の必要性がなかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究用試薬を購入予定である。
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[Journal Article] Usefulness of electrocardiographic voltage to determine myocardial fibrosis in hypertrophic cardiomyopathy2016
Author(s)
Konno T, Nagata Y, Teramoto R, Fujino N, Nomura A, Tada H, Sakata K, Furusho H, Takamura M, Nakamura H, Kawashiri MA, Yamagishi M, Hayashi K.
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Journal Title
Am J Cardiol
Volume: 117
Pages: 443-449
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Whole exome sequencing combined with integrated variant annotation prediction identifies a causative myosin essential light chain mutation (Arg94His) in hypertrophic cardiomyopathy2016
Author(s)
Nomura A, Tada H, Teramoto R, Konno T, Hodatsu A, Won HH, Kathiresan S, Ino H, Fujino N, Yamagishi M, Hayashi K.
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Journal Title
J Cardiol
Volume: 67
Pages: 133-139
DOI
Peer Reviewed
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