2017 Fiscal Year Annual Research Report
Phosphorylase phosphorylation in the heart failure development
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15K09134
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
今野 哲雄 金沢大学, 医学系, 助教 (50377389)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 研至 金沢大学, 附属病院, 助教 (00422642)
小田 彰史 名城大学, 薬学部, 教授 (50433511)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | ホスホリラーゼ / リン酸化 / 肥大型心筋症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者は肥大型心筋症患者でPRKAG2遺伝子変異を同定し、変異をマウスに導入すると筋型グリコーゲンホスホリラーゼに特異的な異常スレオニンリン酸化が生じることを見いだした。本研究の目的は、肥大型心筋症における[1] 筋型グリコーゲンホスホリラーゼ(mGP)異常スレオニンリン酸化の機能的意義を明らかにし、新規心不全発症機序を解明することである。リン酸化部位のスレオニンを負電荷を持つアスパラギン酸で置換することにより、スレオニン部位が恒常的にリン酸化された擬似状態を作成可能である。一方、スレオニンのアラニンへの置換は、脱リン酸化されたスレオニンの擬似状態となる。平成28年度は、mGPの野生型および今回同定したX番スレオニンの置換変異型（Thr X Asp、Thr X Ala）のタグ融合mGP蛋白発現コンストラストを作成した。作成したコンストラクトを培養細胞にトランスフェクションさせ、WT-mGP, ThrXAla-mGP, ThrXAsp-mGPを生成した。NADPH産生量を指標にIn vitroにてmGP活性を測定したところ (Forward 反応)、ThrXAsp-mGPはWT-mGTおよびThrXAla-mGPと比較して有意にホスホリラーゼ活性が低下することが明らかとなった。この傾向は、試験管内にAMPを添加することにより更に明確となった。平成29年度はReverse反応（ゲルアッセイによるmGP活性測定系）によって変異型mGP機能を解析した。Reverse反応においてもForward反応と同様に、ThrXAsp-mGPはWT-mGTおよびThrXAla-mGPと比較して有意にホスホリラーゼ活性が低下することが明らかとなった。次世代シーケンス手法を用いて、肥大型心筋症発端者30例を対象に更なるPRKAG2変異のスクリーニングを行ったが、同遺伝子の変異は検出されなかった。
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[Journal Article] Late Gadolinium Enhancement for Prediction of Mutation-Positive Hypertrophic Cardiomyopathy on the Basis of Panel-Wide Sequencing.2018
Author(s)
Teramoto R, Fujino N, Konno T, Nomura A, Nagata Y, Tsuda T, Tada H, Sakata K, Yamagishi M, Hayashi K, Kawashiri MA.
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Journal Title
Circ J.
Volume: 82
Pages: 1139-1148
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Characteristics of induced pluripotent stem cells from clinically divergent female monozygotic twins with Danon disease.2018
Author(s)
Yoshida S, Nakanishi C, Okada H, Mori M, Yokawa J, Yoshimuta T, Ohta K, Konno T, Fujino N, Kawashiri MA, Yachie A, Yamagishi M, Hayashi K.
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Journal Title
J Mol Cell Cardiol
Volume: 114
Pages: 234-242.
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Heat Failure Phenotypes Induced by Knockdown of DAPIT in Zebrafish: A New Insight into Mechanism of Dilated Cardiomyopathy.2017
Author(s)
Nagata Y, Yamagishi M, Konno T, Nakanishi C, Asano Y, Ito S, Nakajima Y, Seguchi O, Fujino N, Kawashiri MA, Takashima S, Kitakaze M, Hayashi K.
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Journal Title
Sci Rep.
Volume: 7
Pages: 17417-17417.
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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