2016 Fiscal Year Research-status Report
胆汁分泌小胞中miRNAの解析による胆管癌の早期診断マーカーの開発
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15K10194
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
竹村 茂一 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (00322363)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
南山 幸子 京都府立大学, 生命環境科学研究科, 教授 (00362989)
久保 正二 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (80221224)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 胆道癌 / 胆汁 / 印刷業 / バイオマーカー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
肝胆膵癌においてERCPや術中に採取した胆汁のレドックス動態、脂質過酸化物などを測定するとともに患者（印刷業従事胆管癌を含む）胆汁中の細胞外小胞中のmiRNAを解析し、これらを組み合わせることによって独自の早期診断マーカーを探索し、予後不良の胆管癌の早期発見、減少に貢献することを目的とする。
平成27年度（初年度）は印刷従事者胆管癌4例、印刷業以外の肝胆膵癌43例、非担癌症例14例から採取した胆汁について酸化還元動態、変異原性試験、胆汁酸組成を検討した。印刷業従事者とそれ以外の胆管癌の胆汁をHPLC 法により電化化学検出器（クーロケム）で解析した結果を比較すると、印刷業で酸化型グルタチオンの割合が高く、胆汁酸組成では二次胆汁酸が高いことが判明した。印刷業の胆管癌症例では発癌時点ですでに有機溶媒暴露の中止から長期間経過しているため、化学物質の影響は考えにくく、病理組織像を勘案すると薬剤により過去に惹起された胆管炎の遷延あるいはその結果を反映していると考えられた。全症例において変異原性試験は陰性であった。
平成28年度（本年度）は、胆道癌症例及び非胆道癌症例より術中に採取した胆汁を用いてエクソソームの回収を試みた。胆汁中のエクソソームは想定通り微量であり、従来法での精製は困難であった。しかしながら、新規の回収法を開発（詳細は諸事情のため不記載）することができ、エクソソームの確認を行った。エクソソーム中からは、胆管癌特異的miRNAの候補を確認している。今後、本手法を用いてさらなる収量の増加に取り組むとともに、胆管癌特異的なマーカーの解析を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
初年度に予定していた肝胆膵癌患者における胆汁のレドックス動態をHPLC-ECD法での解析は順調に集積でき解析できた。印刷従事者を含む胆道癌症例と非担癌症例ともに変異原性試験では全例陰性であった。胆道癌の新たなバイオマーカーを検出するための胆汁中エクソソームの回収は非常に困難であるためその精製は困難であった。実際、他の研究者においても、現時点でLing Liらによる報告（Hepatology 2014;60:896-907）を含め数編しか見られない。これは、エクソソーム回収に際して、胆汁のpHの影響や、非常にRNAが微量であること、など特殊な要因が関与するためで、我々も当初は通常のRNAシークエンサー法では種々の条件検討を行ったが回収は不可能であったため、研究の進捗がやや遅れた。諸事情により詳細は記載できないが、新たに開発した手法により得られた胆汁中エクソソーム分画よりmiRNAをリードすることができ、現在、症例数を増やし解析を続けている。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初予定した胆道癌に特異性の高いバイオマーカーを検出するために考案した胆汁を用いた解析法のうち、酸化ストレス関連の検討ならびに変異原性試験については順当に終了した。胆汁中のエクソソーム内miRNAの解析について、従来困難であった胆汁中のエクソソームの新規精製法を確立することができた。現在、エクソソーム分画から得たmiRNAの収量を高める手法を考案し、得られたmiRNAプロファイルより胆道癌特異的な変動を検出する予定である。
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| Causes of Carryover |
胆汁よりのエクソソームの精製のためには新規解析手法を講じざるを得ず、その考案ならびに条件検討のため必要な試薬の発注が一部遅れたためです。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
昨年中に新規の解析方法の確立ができたため、本年度には多数例の検索を行う予定です。それに伴い物品費の増加が想定されるため、予定通りの経費を必要とする予定です。
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[Journal Article] Questionnaire survey on work motivations of gastrointestinal and hepatobiliary pancreatic surgeons enrolled in a Japanese national interdisciplinary program.2016
Author(s)
Kaibori M, Nitta H, Hayashi M, Takemura S, Nagano H, Matsui K, Ikoma H, Nakai T, Yasunaga M, Kido M, Aoki T, Rikiyama T, Sano K, Kudo A, Katagiri S, Otsuka Y, Kuroki T, Nomi T, Yano K, Endo I, Ueno M, Kanazawa A, et al.
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Journal Title
J Hepatobiliary Pancreat Sci.
Volume: 23
Pages: 697-702
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Outcomes of Hepatic Resection in Intrahepatic Cholangiocarcinoma Patients with Diabetes, Hypertension, and Dyslipidemia: Significance of Routine Follow-Up.2016
Author(s)
Nishioka T, Kubo S, Tanaka S, Wakasa K, Takemura S, Kinoshita M, Hamano G, Kuwae Y, Shibata T, Suehiro S.
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Journal Title
Liver Cancer
Volume: 5
Pages: 107-120
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Increased FGF19 copy number is frequently detected in hepatocellular carcinoma with a complete response after sorafenib treatment.2016
Author(s)
Kaibori M, Sakai K, Ishizaki M, Matsushima H, De Velasco MA, Matsui K, Iida H, Kitade H, Kwon AH, Nagano H, Wada H, Haji S, Tsukamoto T, Kanazawa A, Takeda Y, Takemura S, Kubo S, Nishio K.
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 23
Pages: 49091-49098
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Outcomes after resection of occupational cholangiocarcinoma.2016
Author(s)
Kubo S, Takemura S, Tanaka S, Shinkawa H, Kinoshita M, Hamano G, Ito T, Koda M, Aota T, Yamamoto T, Terajima H, Tachiyama G, Yamada T, Nakamori S, Arimoto A, Fujikawa M, Tomimaru Y, Sugawara Y, Nakagawa K, Unno M, Mizuguchi T, Takenaka K, et al.
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Journal Title
J Hepatobiliary Pancreat Sci.
Volume: 23
Pages: 556-564
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hypermutation and unique mutational signatures of occupational cholangiocarcinoma in printing workers exposed to haloalkanes.2016
Author(s)
Mimaki S, Totsuka Y, Suzuki Y, Nakai C, Goto M, Kojima M, Arakawa H, Takemura S, Tanaka S, Marubashi S, Kinoshita M, Matsuda T, Shibata T, Nakagama H, Ochiai A, Kubo S, Nakamori S, Esumi H, Tsuchihara K.
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Journal Title
Carcinogenesis
Volume: 37
Pages: 817-826
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Pathological spectrum of bile duct lesions from chronic bile duct injury to invasive cholangiocarcinoma corresponding to bile duct imaging findings of occupational cholangiocarcinoma.2016
Author(s)
Kinoshita M, Kubo S, Nakanuma Y, Sato Y, Takemura S, Tanaka S, Hamano G, Ito T, Terajima H, Yamada T, Nakamori S, Arimoto A, Fujikawa M, Sugawara Y, Yamamoto T, Abue M, Nakagawa K, Unno M, Mizuguchi T, Takenaka K, Shirabe K, Shibata T.
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Journal Title
J Hepatobiliary Pancreat Sci.
Volume: 23
Pages: 92-101
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Screening and surveillance for occupational cholangiocarcinoma in workers exposed to organic solvents.2016
Author(s)
Kubo S, Takemura S, Tanaka S, Nishioka T, Kinoshita M, Hamano G, Ito T, Yamamoto T, Abue M, Aoki M, Nakagawa K, Hijioka S, Miyamoto A, Osaki Y, Endo G, Kumagai S.
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Journal Title
Surg Today.
Volume: 46
Pages: 705-712
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] MicroRNA expression in hepatocellular carcinoma after the eradication of chronic hepatitis virus C infection using interferon therapy.2016
Author(s)
Tamori A, Murakami Y, Kubo S, Itami S, Uchida-Kobayashi S, Morikawa H, Enomoto M, Takemura S, Tanahashi T, Taguchi YH, Kawada N.
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Journal Title
Hepatol Res.
Volume: 46
Pages: 26-35
DOI
Peer Reviewed
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