2017 Fiscal Year Annual Research Report
Research and development of a new therapy for lung carcinoma focused on miR-143.
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15K10271
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| Research Institution | Tokyo Medical University |
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Principal Investigator |
松林 純 東京医科大学, 医学部, 准教授 (00338790)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大平 達夫 東京医科大学, 医学部, 教授 (40317847)
池田 徳彦 東京医科大学, 医学部, 主任教授 (70246205)
高梨 正勝 東京医科大学, 医学部, 講師 (80312007)
岩館 寛大 山陽小野田市立山口東京理科大学, 工学部, 准教授 (70279107)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 肺腺癌 / KRAS / miRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度に引き続き、肺がん細胞を用いた実験を行った。具体的には、KRAS変異を有する肺がん細胞に対するmiRNAの影響の確認と増殖抑制効果について、肺腺がん細胞のA549細胞（KRASの配列12残基目に変異ありGly→Ser）とABC-1細胞（KRAS変異なし）を用いて調べた。昨年度に、KRASの3’-UTR領域に相互作用する可能性があるmiRNAの候補をデーターベースで検索した際に着目した、miR143を含む4種類のmiRNA mimicをRNAiMAX Lipofectamineでトランスフェクションし、24時間後と48時間後に全RNAを抽出した。全RNAを逆転写してcDNAを調製した後、このcDNAを鋳型DNAとして、KRAS、Cyclin D1、Cyclin D2、Cyclin D3、Cyclin E1、Ki67、p21遺伝子の発現量をリアルタイムPCRで解析した。さらに96穴プレートに細胞を500～1000/wellずつ播種し、miRNA mimicをトランスフェクションして、7日目まで経時的に細胞数を定量し、miRNAが細胞増殖へ与える影響を調べた。細胞数の定量はCell Counting Kit-8を用いた。A549細胞とABC-1細胞ともに、いずれのmiRNAをトランスフェクションしても、明らかな増殖速度とKRASへの影響は認められなかった。1種類のmiRNAのみ、顕著な増殖抑制が認められたが、KRAS発現はわずかに抑制されていた程度顕著ではなかった。一方で、4種類のmiRNA mimics をトランスフェクションした時は、24時間後にKRAS遺伝子の抑制が認められた。以上の結果から複数のmiRNAを作用させることにより、KRAS発現を抑制することが示された。
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Research Products
(3 results)
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[Journal Article] Prognostic factors for surgically resected non-small cell lung cancer with cavity formation.2018
Author(s)
Shigefuku S, Kudo Y, Yunaiyama D, Matsubayashi J, Park J, Nagao T, Shimada Y, Saji H, Hagiwara M, Okano T, Kakihana M, Kajiwara N, Ohira T, Ikeda N.
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Journal Title
Journal of Thoracic Disease
Volume: 10
Pages: 973-983
DOI
Peer Reviewed
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