microRNAを標的とした新たな脳虚血の病態解明と治療法の開発

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10296
• Research Institution: University of Yamanashi
• Principal Investigator: 木内 博之 山梨大学, 総合研究部, 教授 (30241623)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉岡 秀幸 山梨大学, 総合研究部, 助教 (20402076) ; 若井 卓馬 山梨大学, 総合研究部, 医学研究員 (30456446)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 虚血性神経細胞傷害 / 虚血耐性 / micro RNA / 脳梗塞

Outline of Annual Research Achievements

microRNA（miRNA）は蛋白質をコードしない小型一本鎖RNAである。線虫での発見後、検出技術の進歩に伴い解析が進み、このmiRNAが標的mRNAの翻訳の中断あるいは遺伝子自体の分解を介し、発生分化や恒常性の維持などの生命現象のみならず、様々な疾患に関与する遺伝子発現を制御していることが明らかとなってきた。脳虚血における神経細胞障害機序においてもmiRNAが重要な役割を担う可能性が指摘されているもののいまだ詳細な機構は解明されていない。また、内因性の強力な細胞保護機構である虚血耐性現象においてもmiRNAを介した遺伝子修飾の役割が予想されている。そこで、本研究では虚血性神経傷害と虚血耐性現象におけるmiRNAの役割を解明し、その阻害や補充による新たな脳梗塞治療法の開発を目指す。
本年度は、ラット副腎髄質クロム親和性細胞腫から樹立された細胞株であるPC12細胞に対し低酸素低グルコース条件（OGD）を負荷する実験を行い、疑似虚血性傷害および耐性獲得現象におけるmiRNAの発現変化を細胞レベルで検討した。具体的には、致死的傷害群では15時間のOGDを、耐性獲得群では非致死的な6時間のOGDの24時間後に15時間のOGDを負荷した。本条件下での耐性獲得群では、致死的傷害群に比べ約30％の細胞保護効果が認められる。これらの細胞から得られたサンプルを使用し、現在miRNAの発現を検討中である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

まずは培養細胞（PC12細胞）での疑似虚血耐性現象でmiRNAの発現を検討しているが、低酸素低グルコース条件（OGD）負荷の至適条件の設定に時間を要し、解析が遅れているため。

Strategy for Future Research Activity

PC12細胞を用いたmiRNA解析を継続して進めていく。また、同時に動物モデル（ラット中大脳動脈閉塞モデル）などを用いた解析も進めていく予定である。

Causes of Carryover

PC12細胞での疑似虚血耐性現象でmiRNAの発現を検討しているが、OGD負荷の至適条件の設定に時間を要したため、解析が遅れている。このため、解析に必要な試薬やチップなどの消耗品の経費が当初の予定より少額となった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

本年度で使用する予定だった試薬やチップなどの消耗品の経費に使用する予定である。