iPS技術を用いた明細胞肉腫起源細胞の解析と、分子標的治療の研究

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10437
• Research Institution: Gifu University
• Principal Investigator: 大野 貴敏 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 非常勤講師 (60281052)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 秋山 治彦 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60402830) ; 永野 昭仁 岐阜大学, 医学部附属病院, 講師 (60422721)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 明細胞肉腫 / EWS/ATF1 / iPS細胞

Outline of Annual Research Achievements

明細胞肉腫モデルマウスに発生したEWS/ATF1誘導性肉腫細胞G1297 (Yamada. et.al, JCI 2013)を使用して，肉腫細胞由来iPS細胞を作製した。樹立した肉腫iPS細胞は分化多能性を有しており，blastocyst injectionによりキメラマウスが得られた。G1297はドキシサイクリン（Dox）投与によってEWS/ATF1発現が誘導できる特徴をもつ。キメラマウスにDoxを投与し、体内のあらゆる臓器にEWS/ATF1発現を誘導したところ、肉腫は明細胞肉腫の好発部位である皮下及び筋膜周囲に特異的に発生しており，その他の臓器では明らかな腫瘍形成を認めなかった。本研究から，発がんにおける特異的細胞種の重要性が浮かび上がった。詳細な起始細胞を同定するため、想定される細胞種特異的なEWS/ATF1発現を誘導すべく、遺伝子組換えシステムを構築した。Rosa26-stop-EWS/ATF1マウスおよびRosa26-stop-rtTA/TetO-EWS/ATF1マウスを作製、さらにScx-CreERT2、Sox10-CreERT2、Tppp3-CreERT2、Mbp-CreERT2マウスを作製、Tyr-CreERT、Mpz-Cre、Krox20-Creマウスを導入した。これらを掛け合わせて、発がんの有無を評価中である。また、細胞種特異的発がんのメカニズムを調べるべく、がん細胞の次世代シークエンス（DNAメチル化、ヒストン修飾）、マイクロアレイを行った。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

各種遺伝子組換えマウスは適切にワークしており，予定した実験を遂行し、結果解析ができる状態である。

Strategy for Future Research Activity

CreシステムやCreERTシステムを利用した明細胞肉腫の起源細胞の同定を進める。ヒト明細胞肉腫細胞株においても同定した起源細胞の特徴を有するかを確認する。論文投稿準備を進める。