腫瘍融解ウイルス治療と放射線治療の併用による骨軟部肉腫に対する新規治療法の開発

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10446
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 杉生 和久 岡山大学, 大学病院, 医員 (10708340)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤原 俊義 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (00304303) ; 尾崎 敏文 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (40294459) ; 國定 俊之 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (80346428) ; 藤原 智洋 岡山大学, 大学病院, 助教 (80639211)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 骨・軟部肉腫 / 放射線治療 / 腫瘍融解アデノウイルス / 併用療法

Outline of Annual Research Achievements

in vitroにおいて、Ewing肉腫（SK-ES-1、RD-ES）、滑膜肉腫（SYO-1）、骨肉腫（HOS、U2OS）、悪性末梢神経鞘腫瘍（NMS-2）、線維肉腫（HT1080）の細胞株を用いて放射線治療単独による細胞障害活性をXTT assayで評価した。NMS-2、HT1080は放射線治療に対して比較的抵抗性を示した。無治療群、腫瘍融解ウイルス（Telomelysin , OBP-301）単独投与、放射線治療単独、Telomelysin＋放射線治療併用でXTT assayを行い、細胞障害活性を比較検討した．また、CalcuSyn software (BioSoft)を用いてcombination indexを算出し、Telomelysinと放射線治療の併用による相乗効果を検討した．
用いた7種類の腫瘍細胞すべてにおいて、Telomelysin，放射線治療単独と比較してTelomelysinと放射線治療の併用では抗腫瘍効果の増強を認め、併用治療による相乗効果を示した。
併用療法における腫瘍細胞のアポトーシスをSK-ES-1を用いてWestern blotでcleaved PARPの発現を確認することにより評価した。併用治療群では単独治療と比較してアポトーシスの増強を認めた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

以下テーマ毎に記載する。
１.骨・軟部肉腫に対する、放射線治療の単独でのin vitroにおける細胞障害活性の検討。NMS-2、HT1080は放射線治療に対して比較的抵抗性を示した。
２. 骨軟部肉腫細胞株に対する、Telomelysinと放射線治療併用の相乗的効果の検討。Telomelysin，放射線療法単独と比較してTelomelysin＋放射線療法併用では抗腫瘍効果の増強を認め、相乗的な効果を示した。
３． 放射線治療単独処理とTelomelysinとの併用処理における細胞死についての検討。併用治療群では単独治療と比較してアポトーシスの増強を認めた。

Strategy for Future Research Activity

今年度は放射線治療とTelomelysin の併用により相乗的な抗腫瘍効果が得られることを確認した。

今後は、放射線治療・Telomelysin 単独処理および併用処理における細胞死と関連シグナルをWestern blot 等により検討する予定である。細胞死については単剤治療と併用治療でのcleaved PARP 発現等をSK-ES-1以外の細胞株でも検討する。γH2AX 等の発現を確認して、Telomelysin による2 本鎖DNA 損傷の修復阻害の有無についての解析を行う。また、蛍光免疫染色でもγH2AX等の発現の有無を確認する。続いて、同所性あるいは異所性腫瘍移植マウスモデルの確立を目指す。

Causes of Carryover

放射線治療単独処理と Telomelysin との併用処理における細胞死と関連シグナルについて評価項目を検討する必要があったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

Western blotやPCRでのタンパク質や遺伝子の発現評価を行うための抗体などの購入を行う予定である。

Research Products

• [Presentation] A novel treatment strategy for bone and soft tissue sarcomas with combination therapy of tumor-specfic oncolytic adenovirus and radiation (2016)
  • Author(s): Toshinori Omori, Yasuaki Yamakawa, Joe Hasei, Hiroshi Tazawa, Tomohiro Fujiwara, Tadashi Komatsubara, Shuhei Osaki, Tsuyoshi Sasaki, Kazuhisa Sugiu, Aki Yoshida Toshiyuki Kunisada, Toshifumi Ozaki, Toshiyoshi Fujiwara
  • Organizer: Orthopaedic Research Society 2016 Annual Meeting
  • Place of Presentation: Orland, Florida
  • Year and Date: 2016-03-05 – 2016-03-08
• [Presentation] 骨・軟部肉腫に対する腫瘍融解アデノウイルスと放射線療法の併用効果 (2015)
  • Author(s): 大森 敏規, 山川 泰明, 長谷井 嬢,田澤 大, 尾崎 修平, 杉生 和久, 藤原 智洋, 国定 俊之, 浦田 泰生,藤原 俊義, 尾﨑 敏文
  • Organizer: 第30回日本整形外科学会基礎学術集会
  • Place of Presentation: 富山
  • Year and Date: 2015-10-22 – 2015-10-23
• [Presentation] Radiosensitization of bone and soft tissue sarcoma cells by tumor-specific oncolytic adenovirus (2015)
  • Author(s): Toshinori Omori, Yasuaki Yamakawa, Joe Hasei, Hiroshi Tazawa, Shuhei Osaki, Tsuyoshi Sasaki, Kazuhisa Sugiu, Tomohiro Fujiwara, Toshiyuki Kunisada, Toshifumi Ozaki, Toshiyoshi Fujiwara
  • Organizer: 第74回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-10
• [Presentation] 骨・軟部肉腫に対する腫瘍融解アデノウイルスと放射線療法の併用効果 (2015)
  • Author(s): 大森 敏規, 山川 泰明, 長谷井 嬢,田澤 大, 尾崎 修平, 杉生 和久, 藤原 智洋, 国定 俊之, 浦田 泰生,藤原 俊義, 尾﨑 敏文
  • Organizer: 第48回日本整形外科学会 骨・軟部腫瘍学術集会
  • Place of Presentation: 高松
  • Year and Date: 2015-07-09 – 2015-07-10
• [Presentation] 骨・軟部肉腫に対する腫瘍融解アデノウイルスと放射線療法の併用効果 (2015)
  • Author(s): 大森 敏規, 山川 泰明, 長谷井 嬢,田澤 大, 尾崎 修平, 杉生 和久, 藤原 智洋, 国定 俊之, 浦田 泰生,藤原 俊義, 尾﨑 敏文
  • Organizer: 第88回日本整形外科学会学術総会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-05-21 – 2015-05-24