Testosterone for the Prevention of Cyclophosphamide -Induced Ovarian Toxicity

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15K10737
• Research Institution: Osaka Medical College
• Principal Investigator: 田辺 晃子 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (70454543)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 林 正美 大阪医科大学, 医学部, 講師 (00551748) ; 大道 正英 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10283764) ; 田中 良道 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10625502) ; 金村 昌徳 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (40298782) ; 恒遠 啓示 大阪医科大学, 医学部, 助手 (70388255) ; 佐々木 浩 大阪医科大学, 医学部, 助教 (80432491) ; 兪 史夏 大阪医科大学, 医学部, 助教 (80625674) ; 寺井 義人 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (90278531) ; 藤原 聡枝 大阪医科大学, 医学部, 講師 (90707960)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 卵巣毒性 / アルキル化剤 / 顆粒膜細胞 / テストステロン / AMH / 卵巣保護

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、小児がん治療に使用される代表的なアルキル化剤系抗がん剤（シクロフォスファミド:CPA)が及ぼす卵巣毒性と、テストステロン(Ts)による卵巣保護作用のメカニズムを明らかにることを目的とした。【方法】１）COV434細胞株が卵巣顆粒膜細胞のモデルとして適しているかどうか、androgen receptor（AR), FSH receptor(FSHR)のmRNA、蛋白の発現を確認した。また、estradiol含有培地中のTs濃度をELISAで測定した。２）CPAの顆粒膜細胞毒性とTsによる細胞保護作用は、MTS assayを用いてcell viablityで検討した。３）Tsのアポトーシス抑制は、BimEL, Caspase 3-cleavedの蛋白発現を確認した。４）週令６週のBalb/cメスマウスにCPA 100mg/kgを3回/週腹腔内投与し、Ts 4mg/kgを4回/週皮下投与した。14日目に安楽死後に解剖し卵巣を固定後スライドを作成し、HE染色にて卵胞数カウントを行なった。心臓採血を行ない、血清AMH値を測定した。【結果】１）COA434においてAR, FSHRの発現を認めた。estradiolを培地に添加すると、時間依存的にTs分泌が上昇したため、COV434は顆粒膜細胞のモデルとして適切であると判断した。２）CPA濃度依存性にCOV434のcell vaiabilityは低下したがTs濃度依存的に改善した。３）CPAにてBimEL, Caspase 3-cleaved 蛋白発現が増加したが、Ts濃度依存的に減少した。４）CPA投与マウスでは原始卵胞数の有意な減少、閉鎖卵胞数の有意な増加、および血清AMHの有意な減少を認めたが、Ts併用により改善した。【結論】CPAによる卵巣毒性はTs投与により改善できる可能性が示唆された。現在論文作成中である。