2016 Fiscal Year Research-status Report
同種アポトーシス細胞貪食によって誘導される口腔扁平上皮癌の細胞活性化機序
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15K11006
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
山崎 学 新潟大学, 医歯学系, 助教 (10547516)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
阿部 達也 新潟大学, 医歯学総合病院, 医員 (70634856)
丸山 智 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (30397161)
程 クン 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (40207460) [Withdrawn]
朔 敬 大阪歯科大学, 歯学部, 客員教授 (40145264)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 口腔がん / 病理学 / アポトーシス / 貪食 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は以下の実験を行った。
1. 同種アポトーシス細胞貪食後の遺伝子発現プロファイル解析：これまでの検討から、同種アポトーシス細胞を貪食したがん細胞の遊走・浸潤能の亢進が示されたので、アポトーシス細胞を貪食したがん細胞で生じる遺伝子発現の変化をDNAマイクロアレイ法にて解析した。本解析には、アポトーシス細胞貪食能が高いCa9-22細胞を用いた。単独培養系、アポトーシス細胞との共培養系、ネクローシス細胞との共培養系の3群において、発現変動量が大きい上位1000遺伝子を抽出し、クラスタリング解析を行った。その結果、3群の中でアポトーシス細胞との共培養系は他の2群とは異なる発現プロファイルを示した。次にアポトーシス細胞との共培養系のみで発現が上昇した509遺伝子を対象にGO解析を行ったところ、phagocytosisやphagosome assemblyに加えて、cell adhesionやcell migration等のGOが抽出され、これらにはCCL5, HCK等の遺伝子が含まれていた。以上より、同種アポトーシス細胞貪食による遊走・浸潤能亢進に関わる候補分子が示された。
2. 同種アポトーシス細胞貪食におけるRAC1活性化の検討：同種アポトーシス細胞貪食は選択的RAC1阻害剤NSC23766の添加により有意に抑制されたことから、アポトーシス細胞と共培養した際のRAC1活性化レベルをプルダウンアッセイにて検討した。アポトーシス細胞の添加から10分～48時間の時系列で検索したものの、単独培養系との明らかな差は認められなかった。既報によるとRAC1活性化の持続時間は極めて短く、また、本実験系ではアポトーシス貪食が必ずしも一斉に起こっていないため、プルダウンアッセイでは有意な差を検出できなかった可能性が考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度の研究成果から、同種アポトーシス細胞貪食によってもたらされる遊走・浸潤能亢進に関与する候補分子が複数示されたものの、分子機構の同定には至らなかった。現在、定量PCRによる検証を進めており、候補分子の絞り込みを行っている。一方、RAC1活性化の検出に関しては、活性化型RAC1に対するモノクローナル抗体を用いた検討を予定している。当初の実験計画から若干進行が遅れているが、研究の方向性については妥当と考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
DNAマイクロアレイの結果から示唆された分子について定量PCRで検証を行い、これらがアポトーシス細胞貪食および遊走・浸潤にどのように寄与するかを検討する。さらに、アポトーシス細胞貪食により活性化するシグナル伝達経路を抗体アレイ法を用いて探索する。
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| Causes of Carryover |
研究計画にしたがって物品費および旅費を支出してきたが、必要試薬の購入額に満たない残額が生じた。不要な支出を避けるために、次年度使用額として計上した次第である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度分の助成金と合算することにより、試薬・消耗品購入費用として有効に使用する予定である。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Aberrant expression of the tight junction molecules claudin-1 and zonula occludens-1 mediates cell growth and invasion in oral squamous cell carcinoma.2016
Author(s)
Babkair H, Yamazaki M, Uddin MS, Maruyama S, Abe T, Essa A, Sumita Y, Ahsan MS, Swelam W, Cheng J, Saku T.
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Journal Title
Human Pathology
Volume: 57
Pages: 51-60
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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