2017 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of proteins in salivary exosomes
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15K11063
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| Research Institution | THE NIPPON DENTAL UNIVERSITY COLLEGE AT NIIGATA |
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Principal Investigator |
今井 あかね 日本歯科大学新潟短期大学, その他部局等, 教授 (60180080)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松田 貴絵 (山下貴絵) 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 助教 (10633646)
横須賀 宏之 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (30267231)
辻村 麻衣子 (羽下麻衣子) 日本歯科大学, 新潟生命歯学部, 准教授 (60535219)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | エクソソーム / 唾液 / タンパク質 / 生理活性 / 加齢変化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、疾患マーカーとして注目されているmicroRNAはエクソソームと呼ばれる細胞外小胞顆粒中に存在する。エクソソームは新しい細胞間情報伝達システムとして注目されており疾病の診断、がんの転移、引いてはドラッグデリバリーに応用しようという研究が盛んに行われている。唾液中にもエクソソームが存在しているが、唾液は他の体液に比べ、その物理的特性から安定的にエクソソームを抽出することが容易ではない。平成28年度までは生物科学実験施設改築など研究環境上の問題により計画通りに実験を行うことができず進捗状況が遅れていたが、最終年度はアプローチの方向性を変えてエクソソームの分泌メカニズムを探求した。まず、唾液から安定的にエクソソームを抽出する方法を検討した。最近、エクソソームの研究が盛んなことより各社がエクソソーム抽出の試薬および抽出キットを発売しており、唾液からの抽出に適したものを探し出した。エクソソームが抽出されているかを電気泳動ゲルの銀染色、およびエクソソームマーカーであるCD9、CD63、CD81およびAlixなどの抗体を用いてウエスタンブロッティング法により確認した。さらにNanoSightにより粒子を確認してLC/MS-MS解析により含有しているタンパク質を網羅的に検出した。その結果、small proline-rich protein群、Rabタンパク質を含むGTP結合タンパク質群、シスタチン群などをエクソソーム中に見出した。唾液エクソソームには、生理活性機能を持つタンパク質および膜融合や膜輸送に関連するタンパク質を含むことが明らかになり、内包する生理活性物質を分泌して、他臓器や他の生体に伝達する可能性が示唆された。この内容は2018年度のIADR、生化学会大会および歯科基礎医学会学術大会で発表する予定である。
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