2016 Fiscal Year Research-status Report
ゼブラフィッシュ遺伝学とウイルスベクターを用いた神経回路トレーシング法の確立
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15K14523
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
日比 正彦 名古屋大学, 生物機能開発利用研究センター, 教授 (40273627)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 逆光性トレーシング / 狂犬病ウイルス / 神経回路 / 神経解剖学 / 小脳 / ゼブラフィッシュ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
脊椎動物の神経回路の形成・機能を理解する上で、ゼブラフィッシュは有用なモデル動物である。ゼブラフィッシュの神経回路は、哺乳類の神経回路と類似点があるもののの、未だ神経回路構造の全貌は明らかとなっていない。本研究では、組換え狂犬病ウイルスを用いて、ゼブラフィッシュの小脳神経回路、特に小脳入力線維の解析を行った。本研究に使用する組換え狂犬病ウイルスには、ニワトリのレトロウイルスASLV由来のエンベロープタンパク質EnvAが発現しており、ゼブラフィッシュ小脳ニューロン（プルキンエ細胞および顆粒細胞）に、EnvA受容体であるTVAとmCherry融合タンパク質（TVA-mCherry）を発現させることで、組換え狂犬病ウイルスを感染させることができる。さらに、同じニューロンに狂犬病ウイルス外被糖タンパク質（G）を発現させることで、ウイルス粒子にGが組み込まれ、軸索を逆行性に輸送され、入力線維へ経シナプス的に感染し、入力線維ニューロンをGFPで標識することができる。本年度は、プルキンエ細胞特異的遺伝子aldolase Ca（aldoca）と顆粒細胞特異的遺伝子cerebellin12（cbln12）のプロモーターを用いて、TVA-mCherryおよびGを発現するトランスジェニッックゼブラフィッシュ系統を作製した。顆粒細胞にTVA-mCherryを発現するゼブラフィッシュ成魚の小脳に組換え狂犬病ウイルス液を注入したところ、GFPを発現する顆粒細胞を見出した。このことから、少なくとも組換え狂犬病ウイルスが顆粒細胞へ感染することを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
組換え狂犬病ウイルスを感染させるためのトランスジェニックゼブラフィッシュの作製に、予想より時間がかかってしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
組換え狂犬病ウイルスを感染させるゼブラフィッシュ系統は全て作製している。今後は、感染実験を行い、神経回路トレーシング法を確立するとともに、小脳顆粒細胞の入力線維を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
組換え狂犬病ウイルスを感染させるトランスジェニックゼブラフィッシュの作製はできたものの、感染実験がまだ完了していない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
感染実験を続け、小脳ニューロンの入力線維を明らかにする。
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[Journal Article] REP1 inhibits FOXO3-mediated apoptosis to promote cancer cell survival.2017
Author(s)
Song KH, Woo SR, Chung JY, Lee HJ, Oh SJ, Hong SO, Shim J, Kim YN, Rho SB, Hong SM, Cho H, Hibi M, Bae DJ, Kim SY, Kim MG, Kim TW, Bae YK.
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Journal Title
Cell Death & Disease
Volume: 8
Pages: e2536
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Osteocrin, a peptide secreted from the heart and other tissues, contributes to cranial osteogenesis and chondrogenesis in zebrafish.2017
Author(s)
Chiba A, Watanabe-Takano H, Terai K, Fukui H, Miyazaki T, Uemura M, Hashimoto H, Hibi M, Fukuhara S, Mochizuki N.
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Journal Title
Development
Volume: 144
Pages: 334-344
DOI
Peer Reviewed
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