2016 Fiscal Year Annual Research Report
Foot and mouth disease virus specific translation inhibition and application for development of disease resistant livestock
| Project/Area Number |
15K14871
|
|---|
| Research Institution | Kagoshima University |
|---|
Principal Investigator |
小原 恭子 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 教授 (20225478)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | FMDV / IRES / 宿主因子 / PTB / 4E-BP1 / ITAF45 / 細胞株 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までの研究では、口蹄疫ウイルス(Foot-and mouth disease virus ; FMDV)ゲノムRNAの非翻訳領域(5’UTR)内の40Sリボゾームの内部認識領域(Internal Ribosomal Entry Site; IRES)からの翻訳活性をHEK293（ヒト）、MDCK(イヌ)、MDBK(ウシ)、CPK(豚)細胞株でIRES活性を比較した結果、翻訳活性はMDBK, MDCK, HEK293, CPK細胞の順で強かったため、FMDVの感染域との相関はない事が明らかとなった。また、IRES活性に関与する宿主因子が、poly-pyrimidine-tract binding protein (PTB), eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 1 (4E-BP1)とIRES trans-acting factor (ITAF45)である事が明らかとなった。これら宿主因子の翻訳における作用は各種細胞株で確認できた。そこで今年度は、FMDV-IRES活性を阻害する薬剤や低分子化合物のスクリーニングに役立つFMDV-IRES発現細胞の樹立を行った。由来する動物種によって細胞でのIRES活性が大きく異ならない事や、siRNAによるゲノムワイドなランダムノックダウンが容易にできるように既に全ゲノム配列が明らかとなっているヒト由来の細胞HEK293を用いて作製した。これらの細胞では、海椎茸(Renilla)ルシフェラーゼと蛍(Firefly)ルシフェラーゼ遺伝子の間にFMDV-IRES配列を持つジシストロニックレポータープラスミドを発現させ、ネオマイシン耐性遺伝子を用いて発現細胞を樹立した。その結果、FireflyルシフェラーゼとRenillaルシフェラーゼを発現する40クローンの細胞株を樹立した。今後これらの細胞を用いてFireflyルシフェラーゼ活性のみを阻害し、Renillaルシフェラーゼ活性を阻害しない物質を探索する事によってFMDV-IRES特異的な阻害剤を得る予定である。また、ゲノムワイドなsiRNAやCrispr/Cas9によるランダムノックダウンにも有用なツールとなる事が期待される。
|
-
-
-
[Journal Article] Establishment of an intermittent cold stress model using Tupaia belangeri and evaluation of compound C737 targeting neuron-restrictive silencer factor.2016
Author(s)
Hai-Ying C, Nagano K, Ezzikouri S, Yamaguchi C, Kayesh ME, Rebbani K, Kitab B, Nakano H, Kouji H, Kohara M, Tsukiyama-Kohara K.
-
Journal Title
Exp Anim.
Volume: 65
Pages: 285-92
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
-
[Journal Article] Molecular epidemiological study of adenovirus infecting western lowland gorillas and humans in and around Moukalaba-Doudou National Park (Gabon).2016
Author(s)
Nkogue CN, Horie M, Fujita S, Ogino M, Kobayashi Y, Mizukami K, Masatani T, Ezzikouri S, Matsuu A, Mizutani T, Ozawa M, Yamato O, Ngomanda A, Yamagiwa J, Tsukiyama-Kohara K.
-
Journal Title
Virus Genes
Volume: 52
Pages: 671-8
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
-
-
-
-
