2016 Fiscal Year Annual Research Report
The effective method for generation of platelets from canine iPS cells by perfusion cocultivation
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15K14888
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
稲葉 俊夫 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 教授 (00137241)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉浦 喜久弥 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 准教授 (30171143)
鳩谷 晋吾 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 准教授 (40453138)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 再生医療 / 統合動物科学 / iPS細胞 / 血小板 / バイオテクノロジー / トランスレーショナルリサーチ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、ヒトと共通の生活習慣病や老齢化による疾病が自然発症するイヌに着眼し、 イヌのiPS細胞を作製し、本細胞を用いた再生獣医学研究を推進するもので、イヌiPS細胞を用いて、造血系分化誘導サイトカイン遺伝子を導入したフィーダー細胞上で培養した後、生体内での血小板生成過程を模した体外培養システムで、効率的に血小板へ分化誘導することを目的としている。本研究年度では、イヌ造血サイトカインを発現するフィーダー細胞の作製、および前年度に作製した薬剤誘導性ベクターによるイヌiPS細胞は血小板に分化誘導することができなかったために、低分子阻害剤を用いて多分化能を有するイヌ多能性幹細胞の作製について検討し、以下の結果を得た。
１．前年度に作製したイヌ造血サイトカイン遺伝子導入OP9細胞株を培養し、本OP9細胞株からの造血サイトカインの発現を調べた結果、幹細胞因子(SCF)、トロンボポエチン(TPO)、およびエリスロポエチン(EPO)のタンパク質発現が確認された。
２．核初期化４因子を導入したイヌ体細胞を、トランスフォーミング増殖因子(TGF)β1阻害剤、p38マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ阻害剤などの低分子化合物の存在下で培養することにより、長期継代可能で胚体外内胚葉(XEN)マーカーを発現する人工胚体外内胚葉細胞様細胞（iXEN様細胞）の作製に成功した。本細胞は多分化能を有し、肝細胞特異的なマーカーであるアルブミンとCYP3A4遺伝子を発現する肝細胞、毛細胆管膜マーカーであるMRP2タンパクを発現する胆管上皮細胞、さらに、白血球系細胞へ分化させることができた。
今回の結果から、iXEN様細胞株とイヌ造血サイトカイン発現フィーダー細胞との共培養による血小板の大量培養に繋げていきたい。
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[Journal Article] Feeder-independent canine induced pluripotent stem cells maintained under serum-free conditions2017
Author(s)
Nishimura T, Hatoya S, Kanegi R, Wijesekera DPH, Sanno K, Tanaka E, Sugiura K, Kawate N, Tamada H, Imai H, Inaba T.
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Journal Title
Molecular Reproduction and Development
Volume: 84
Pages: 329-339
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Production of feline leukemia inhibitory factor (LIF) with biological activity in Escherichia coli2016
Author(s)
1.Kanegi R, Hatoya S, Tsujimoto Y, Takenaka S, T. Nishimura T, Wijewardana V, Sugiura K, Takahashi M, Kawate N, Tamada H, Inaba T.
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Journal Title
Theriogenology
Volume: 86
Pages: 604-611
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Manipulation of tumor microenvironment by cytokine gene transfection enhances dendritic cell-based immunotherapy2016
Author(s)
Wijesekera D.P.H., Sugiura K, Ichida C, Yuba E, Kono K, Yamate J, Kanegi R, Nishimura T, Nadeeka H.D., Hatoya S, Inaba T.
Organizer
ICI 2016-International Congress of Immunology 2016
Place of Presentation
Melbourne Convention and Exhibition Centre （Melbourne, Australia）
Year and Date
2016-08-21 – 2016-08-26
Int'l Joint Research
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[Presentation] Generation of multipotent canine extraembryonic endoderm-like cells via the formation of induced pluripotent stem cells.2016
Author(s)
Unezaki N, Nishimura T, Kanegi R, Wijesekera DPH, Hatoya S, Sugiura K, Kawate N, Tamada H, Imai H, Inaba T.
Organizer
The International Society for Stem Cell Research (ISSCR) 14th Annual Meeting
Place of Presentation
Moscone West（San Francisco, USA）
Year and Date
2016-06-22 – 2016-06-25
Int'l Joint Research
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