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2015 Fiscal Year Research-status Report

HSV細胞間感染受容体の同定

Research Project

Project/Area Number 15K15138
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

有井 潤  東京大学, 医科学研究所, 助教 (30704928)

Project Period (FY) 2015-04-01 – 2017-03-31
KeywordsHSV / ヘルペスウイルス / 細胞間感染 / レセプター / 糖タンパク質
Outline of Annual Research Achievements

単純ヘルペスウイルス(HSV)はヒトに口唇ヘルペス、脳炎、性器ヘルペス、眼疾患といった多様な病態を引き起こし、関連する医療費はアメリカ合衆国で年間30億ドルと試算されるほど大きな問題となっている。本研究はHSVによる細胞間感染に焦点を当てる。これはウイルス粒子が細胞外に放出されず直接隣の細胞に感染する方法であり、HSVでは主要な感染経路であるものの、その複雑性からほとんど研究が行われていない。本研究では、HSVの細胞感染に重要な役割を担うウイルス糖タンパク質gE/gI複合体に注目する。gE/gIに結合し、細胞間感染を仲介する宿主因子、すなわちHSVの細胞間感染受容体を二種類のスクリーニングを行うことによって同定し、HSV細胞間感染におけるメカニズムを明らかにすることを試みている。
HSVはVero細胞では巨大なplaqueを形成するが、HeLa細胞においてはほとんどplaqueを形成しない。HeLa細胞では細胞感染を仲介する因子が低発現となっているという仮説を立て、Vero細胞のcDNA libraryをHeLa細胞に導入し、HSVによるplaque形成能が上昇したものを選抜した。また感染細胞からgEを二重免疫沈降で精製後、超高感度質量解析装置(LC-MS/MS法)を用いることで、gEと会合する700種のタンパク質を同定した。これら二つのスクリーニングの結果共通する因子に注目して今後研究を進める予定である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ウイルスによる細胞間感染は、生体内における病態発現に重要であると考えられているものの、その具体的なメカニズムはほとんど明らかになっていない。本研究は細胞間感染に特異的に用いられる宿主因子を同定しようとする試みである。細胞感染の効率を上げる因子の探索、および細胞感染に必須なウイルス因子と会合する宿主因子の探索という全く関連のない二つのスクリーニングによって、同じ因子を得ることができたのは、驚くべきことであり、二重のスクリーニングの妥当性を示すものであるといえる。得られた因子はすでに、過剰発現によって細胞間感染を促進すること、gEと会合することが明らかになっており、今後実際にどのようにこの因子がHSVの細胞間感染に寄与するのか解析は比較的容易であると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

HSVが巨大なplaqueを形成するヒト由来の細胞であるA549やHaCaTなどを用い、得られた因子のノックダウンあるいはノックアウトを試みる予定である。これらの処置によってHSVの伝播がどのように変化するのかを、plaqueの定量、電子顕微鏡解析を用いて解析する。とくにgEの欠損株においては、感染細胞におけるウイルスカプシドの局在が変化することが知られており、同様の現象がこの因子の阻害によって起きるか否かに注目する。また、この因子はほかの宿主因子と会合しシグナルを伝達することが知られており、その特異的な阻害剤が存在する。阻害剤を用いることで、HSVによるplaque形成やカプシドの局在に影響が出るか否かも解析する。阻害剤がHSVによる細胞間感染を阻害することが明らかになった場合は、マウス感染モデルにおいて当薬剤がHSVによる病態を阻害するかどうかも解析することで、生体内のおける細胞間感染の意義を示し、新たな抗HSV剤の可能性を提示したいと考えている。

Causes of Carryover

当研究課題は、HSVの細胞間感染受容体を探索し、分子メカニズムを明らかにすることを目的としている。そのために、これまで研究代表者らは、HSVによる細胞間感染が効率よく起こる細胞(例;Vero細胞)と細胞間感染の効率が著しく悪い細胞(例;HeLa細胞)を用いて研究を進めてきた。得られた候補因子のノックダウン・ノックアウトを試みるために用いる細胞は、ヒト由来であることが望ましいが、HSVが細胞間感染を効率よく行えるヒト由来細胞での効率的なノックダウン・ノックアウトを行うことは当初困難であった。当初は、細胞間感染の効率が低いものの、ノックダウン・ノックアウトのシステムが確立しているHeLa細胞を用いて解析していた。しかし本年度の後半において、これらの細胞でもノックダウン・ノックアウトが可能なシステムの情報を得ることができた。このため、細胞株を変更し、研究計画が次年度へ繰り越されることとなった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

HSVが巨大なplaqueを形成するヒト由来の細胞であるA549やHaCaTなどを用い、得られた因子のノックダウンおよびノックアウトを試みる予定である。これらの処置によってHSVの伝播がどのように変化するのかを、plaqueの定量、電子顕微鏡解析を用いて解析する。また、この因子はほかの宿主因子と会合しシグナルを伝達することが知られており、その特異的な阻害剤が存在する。阻害剤を用いることで、HSVによるplaque形成やカプシドの局在に影響が出るか否かも解析する。

  • Research Products

    (30 results)

All 2016 2015

All Journal Article (8 results) (of which Peer Reviewed: 8 results,  Open Access: 7 results,  Acknowledgement Compliant: 8 results) Presentation (22 results) (of which Int'l Joint Research: 13 results)

  • [Journal Article] Roles of Us8A and its phosphorylation mediated by Us3 in herpes simplex virus 1 pathogenesis.2016

    • Author(s)
      Kato A, Tomoko A, Oda S, Watanabe M, Koyanagi N, Arii J, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Virol.

      Volume: JVI Pages: .00446-16

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Cellular Transcriptional Coactivator RanBP10 and Herpes Simplex Virus 1 ICP0 Interact and Synergistically Promote Viral Gene Expression and Replication.2016

    • Author(s)
      Sato Y, Kato A, Maruzuru Y, Oyama M, Kozuka-Hata H, Arii J, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Virol.

      Volume: 90 Pages: 3173-3186

    • DOI

      doi: 10.1128/JVI.03043-15.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Ubiquitin-specific protease 9X in host cells interacts with herpes simplex virus 1 ICP0.2016

    • Author(s)
      Sato Y, Kato A, Arii J, Koyanagi N, Kozuka-Hata H, Oyama M, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Vet Med Sci.

      Volume: 78 Pages: 405-410

    • DOI

      doi: 10.1292/jvms.15-0598.

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Characterization of a Herpes Simplex Virus 1 (HSV-1) Chimera in Which the Us3 Protein Kinase Gene Is Replaced with the HSV-2 Us3 Gene.2015

    • Author(s)
      Shindo K, Kato A, Koyanagi N, Sagara H, Arii J, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Virol.

      Volume: 90 Pages: 457-473

    • DOI

      doi: 10.1128/JVI.02376-15.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Role of Host Cell p32 in Herpes Simplex Virus 1 De-Envelopment during Viral Nuclear Egress.2015

    • Author(s)
      Liu Z, Kato A, Oyama M, Kozuka-Hata H, Arii J, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Virol.

      Volume: 89 Pages: 8982-8998

    • DOI

      doi:10.1128/JVI.01220-15.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Herpes Simplex Virus 1 Recruits CD98 Heavy Chain and β1 Integrin to the Nuclear Membrane for Viral De-Envelopment.2015

    • Author(s)
      Hirohata Y, Arii J, Liu Z, Shindo K, Oyama M, Kozuka-Hata H, Sagara H, Kato A, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Virol.

      Volume: 89 Pages: 7799-7812

    • DOI

      doi: 10.1128/JVI.00741-15.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Function of the Herpes Simplex Virus 1 Small Capsid Protein VP26 Is Regulated by Phosphorylation at a Specific Site.2015

    • Author(s)
      Kobayashi R, Kato A, Oda S, Koyanagi N, Oyama M, Kozuka-Hata H, Arii J, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      J Virol.

      Volume: 89 Pages: 6141-6147

    • DOI

      doi: 10.1128/JVI.00547-15.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Interactome analysis of herpes simplex virus 1 envelope glycoprotein H. Hirohata Y, Kato A, Oyama M, Kozuka-Hata H, Koyanagi N, Arii J, Kawaguchi Y.2015

    • Author(s)
      Hirohata Y, Kato A, Oyama M, Kozuka-Hata H, Koyanagi N, Arii J, Kawaguchi Y.
    • Journal Title

      Microbiol Immunol.

      Volume: 59 Pages: 331-337

    • DOI

      doi: 10.1111/1348-0421.12255.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] Jun Arii, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi2015

    • Author(s)
      Membrane deformation for HSV-1 secondary envelopment is mediated by its glycoproteins.
    • Organizer
      第63回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      福岡国際会議場(福岡・福岡)
    • Year and Date
      2015-10-22 – 2015-10-24
  • [Presentation] Akhisa Kato, Shinya Oda, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi2015

    • Author(s)
      Phosphorylation of an HSV-1 Us8A promotes viral pathogenecity by regulating the ability of the virus to invade the CNS from peripheral sites.
    • Organizer
      第63回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      福岡国際会議場(福岡・福岡)
    • Year and Date
      2015-10-22 – 2015-10-24
  • [Presentation] RanBP10 acts like HSV-1 ICP0 in regulation of viral gene expression in infected cells.2015

    • Author(s)
      Yuka Sato, Akihisa Kato, Yuhei Maruzuru, Hirohata Yoshitaka, Shumpei Tsuda, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第63回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      福岡国際会議場(福岡・福岡)
    • Year and Date
      2015-10-22 – 2015-10-24
  • [Presentation] p53 is a critical host regulator of Herpes simplex encephalitis.2015

    • Author(s)
      Yumei Maruzuru, Naoto Koyanagi, Jun Arii, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第63回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      福岡国際会議場(福岡・福岡)
    • Year and Date
      2015-10-22 – 2015-10-24
  • [Presentation] Herpes simplex virus ICP22 interacts with viral nuclear egress factors UL31, UL34 and Us3, and regulates viral nuclear egress.2015

    • Author(s)
      Yuhei Maruzuru, Keiko Shindo, Zhuoming Liu, Masaaki Oyama, Hiroko Kozuka-Hata, Jun Arii, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Function of hte herpes simplex virus 1 small capsid protein VP26 is regulated by phosphorylation at a specific site.2015

    • Author(s)
      Ryosuke Kobayashi, Akihisa Kato, Jun Arii, Yasuhi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Multiple glycoproteins of herpes simplex virus 1 deform membrane for secondary envelopment2015

    • Author(s)
      Jun Arii, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Phosphorylation of SNX3 induced the protection of HSV-1 protein from the lysosomal degradation for efficient neurovirulence.2015

    • Author(s)
      Akihisa Kato, Jun Arii, Yasuhi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] RanBP10, a novel host cellular protein that interacts with a herpes simplex virus 1 (HSV-1) regulatory protein ICP0, regulates viral gene expression by acting like ICP0 in HSV-1 infected cells.2015

    • Author(s)
      Yuka Sato, Akihisa Kato, Yuhei Maruzuru, Yoshitaka Hirohata, Shumpei Tsuda, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Down-regulation of a cytokine expression by HSV-1 UL13 protein kinase is critical for herpes encephalitis.2015

    • Author(s)
      Naoto Koyanagi, Takahiko Imai, Keiko Shindo, Jun Arii, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Role of an interaction between two conserved tegument proteins in herpes simplex virus 1 (HSV-1) replication.2015

    • Author(s)
      Shinya Oda, Akihisa Kato, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Elucidation of the type-specific differences in herpes simplex virus Us3 genes.2015

    • Author(s)
      Keiko Shindo, Akihisa Kato, Koyanagi Naoto, Jun Arii, Yasuhi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Herpes simplex virus 1 recruits CD98 heavy chain and b1 integrin to the nuclear membrane for viral de-envelopment.2015

    • Author(s)
      Yoshitaka Hirohata, Jun Arii, Zhuoming Liu, Keiko Shindo, Masaaki Oyama, Hiroko Kozuka-Hata, Hiroshi Sagara, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Role of host cell protein p32 in herpes simplex virsu 1 de-envelopment during viral nuclear egress.2015

    • Author(s)
      Zhuoming Liu, Akihsa Kato, Masaaki Oyama, Hiroko Kozuka-Hata, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      第14回あわじしま感染症・免疫フォーラム
    • Place of Presentation
      淡路夢舞台(兵庫・淡路)
    • Year and Date
      2015-09-08 – 2015-09-11
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Herpes simplex virus 1 glycoproteins induce membrane deformation for efficient viral secondary envelopment.2015

    • Author(s)
      Jun Arii, Akihisa Kato, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      40th annual international herpesvirus workshop
    • Place of Presentation
      Boise (USA)
    • Year and Date
      2015-06-25 – 2015-06-29
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Identification of a host cell protein , RanBP10, which acts like ICP0 in HSV-1 infected cells.2015

    • Author(s)
      Yuka Sato, Akihisa Kato, Yuhei Maruzuru, Yoshitaka Hirohata, Shumpei Tsuda, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      40th annual international herpesvirus workshop
    • Place of Presentation
      Boise (USA)
    • Year and Date
      2015-06-25 – 2015-06-29
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Elucidation of a critical interaction between the two conserved tegument proteins for HSV-1 secondary envelopment.2015

    • Author(s)
      Shinya Oda, Akihisa Kato, Yuichi Furuhata, Jun Arii, Yasushi Kawaguchi
    • Organizer
      40th annual international herpesvirus workshop
    • Place of Presentation
      Boise (USA)
    • Year and Date
      2015-06-25 – 2015-06-29
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] HSV-1のウイルス増殖および病態発現はキャプシドタンパク質VP26のリン酸化によって制御される2015

    • Author(s)
      小林 亮介、加藤 哲久、有井 潤、川口 寧
    • Organizer
      第29回ヘルペスウイルス研究会
    • Place of Presentation
      長崎にっしょうかん(長崎・長崎)
    • Year and Date
      2015-06-04 – 2015-06-06
  • [Presentation] 2型膜タンパク質Us8Aリン酸化の生物学的意義の解明2015

    • Author(s)
      加藤 哲久、尾田 信也、有井 潤、川口 寧
    • Organizer
      第29回ヘルペスウイルス研究会
    • Place of Presentation
      長崎にっしょうかん(長崎・長崎)
    • Year and Date
      2015-06-04 – 2015-06-06
  • [Presentation] テグメント蛋白質UL51とUL14は複合体としてHSV-1最終エンベロープ獲得に寄与する2015

    • Author(s)
      尾田 真也、有井 潤、加藤 哲久、川口 寧
    • Organizer
      第29回ヘルペスウイルス研究会
    • Place of Presentation
      長崎にっしょうかん(長崎・長崎)
    • Year and Date
      2015-06-04 – 2015-06-06
  • [Presentation] HSV-1の糖タンパク質は、膜変性引き起こすことで効率的なsecondary envelopmentに貢献する2015

    • Author(s)
      有井 潤、加藤 哲久、川口 寧
    • Organizer
      第29回ヘルペスウイルス研究会
    • Place of Presentation
      長崎にっしょうかん(長崎・長崎)
    • Year and Date
      2015-06-04 – 2015-06-06
  • [Presentation] HSV-1感染細胞においてICP0と類似の機能をもつ宿主蛋白質RanBP10の同定2015

    • Author(s)
      佐藤 由佳,加藤 哲久,丸鶴 雄平,廣畑 吉崇,津田 峻平,有井 潤,川口 寧
    • Organizer
      第29回ヘルペスウイルス研究会
    • Place of Presentation
      長崎にっしょうかん(長崎・長崎)
    • Year and Date
      2015-06-04 – 2015-06-06

URL: 

Published: 2017-01-06  

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