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2015 Fiscal Year Research-status Report

Liquid Biopsyによるグリオーマの時間的・空間的多様性の解明

Research Project

Project/Area Number 15K15529
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

溝口 昌弘  九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (50380621)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 佐山 徹郎  九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30346788)
吉本 幸司  九州大学, 大学病院, 講師 (70444784)
天野 敏之  九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (70448413)
橋口 公章  九州大学, 大学病院, 講師 (80448422)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2017-03-31
Keywordsliquid biopsy / cell free DNA / グリオーマ / microRNA / 脳腫瘍
Outline of Annual Research Achievements

2015年度は、九州大学及び関連施設にて新規に摘出術をうけた57例のグリオーマ症例の遺伝子解析を施行した。同症例より、術前血液サンプル、術中髄液サンプルを採取し、保管した。分子病理学的背景を加味し、5例の血液と3例の髄液より、エクソソームを分離し、分泌型miRNAを抽出し、東レ3D-Gene miRNA Olig chipを用いた網羅的発現解析を行った。正常血液と比較し発現が上昇しており、髄液中でもその上昇が確認できるmiRNA (miR-4530, -4294, -4534)を同定した。蓄積した症例に対し、TaqMan法を用いた再評価を行う為、TaqManプローブを作成した。
さらに同血液サンプルからのcell free DNA(cfDNA)の抽出、解析に着手した。血漿、血清を用い、2つの抽出キット(Qiagen社、Promega社)を使用し、比較検討した。より高いDNA濃度に濃縮できるPromega社キットを用い、純度の高い血漿を用いて解析を進めた。グリオーマ患者血液から採取した血中cfDNA量は、他のがん患者と比較し少なく、健常人と同程度であった。DNA量が微量であり、通常のPCRを用いた解析法では解析困難であり、IDH1野生型と変異型に特異的プローブを用いたTaqMan法を用いた解析を導入した。条件設定によりIDH1変異型6例中2例で血漿中cfDNA解析にてIDH1変異を同定することができた。IDH1野生型では変異型は同定できず特異的な結果を得られたが、その感度は低かった。さらに精度をあげた解析を行う為、デジタルPCRを導入し、その条件設定を行った。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

血中バイオマーカーとして、miRNAとcfDNAに着目した研究を進めることができた。グリオーマ症例の血液サンプルも蓄積されており、解析法が確立されれば標的となるmiRNAとcfDNAの解析を進め得る状況をつくることができた。微量核酸の解析であり、その解析条件設定に検討を要した。最終的にはデジタルPCRの導入を決定した。

Strategy for Future Research Activity

miRNA解析に関しては、腫瘍の悪性度、組織型、遺伝子型の差による、miRNAの相関を腫瘍で確認するとともに、血液中に反映されるmiRNAの推移を検討する。cfDNAに関しては、グリオーマ患者血液中のcfDNA量は低く、さらに精度をあげるため、デジタルPCRを導入し、今後はその解析に使用する。さらに標的とする遺伝子も増やし、腫瘍の遺伝子型を反映することが可能か検討を進める。さらに臨床経過中の血液を対象に解析を進め、リアルタイムのモニタリングの確立に努める。

Causes of Carryover

手術症例数に依存し、サンプルより核酸抽出を行っており、本年度は、少数の症例より核酸抽出法、遺伝子解析法を検討した。最終的に解析法を確立し、蓄積したサンプル解析を開始する予定であり、次年度使用を予定している。

Expenditure Plan for Carryover Budget

新たなcfDNA解析法として、デジタルPCR導入を開始しており、その試薬に使用する。さらに蓄積したサンプルの解析に次年度に使用を予定している。。

  • Research Products

    (7 results)

All 2015

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (5 results) (of which Invited: 1 results)

  • [Journal Article] Detection of proneural/mesenchymal marker expression in glioblastoma: temporospatial dynamics and association with chromatin-modifying gene expression.2015

    • Author(s)
      Murata H, Yoshimoto K, Hatae R, Akagi Y, Mizoguchi M, Hata N, Kuga D, Nakamizo A, Amano T, Sayama T, Iihara K.
    • Journal Title

      J Neurooncol

      Volume: 125 Pages: 33-41

    • DOI

      10.1007/s11060-015-1886-y

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] 分子病理学に基づくグリオーマ分類2015

    • Author(s)
      溝口昌弘
    • Journal Title

      脳神経外科ジャーナル

      Volume: 24 Pages: 366-377

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] pGBMにおけるIDH/TERT promoter/ch10 LOHの解析2015

    • Author(s)
      波多江龍亮、秦暢宏、赤木洋二郎、村田秀樹、空閑太亮、吉本幸司、溝口昌弘、飯原弘二
    • Organizer
      第33回日本脳腫瘍学会学術集会
    • Place of Presentation
      京都府京都市
    • Year and Date
      2015-12-06 – 2015-12-08
  • [Presentation] ベバシズマブ時代における悪性神経膠腫の診断と治療2015

    • Author(s)
      溝口昌弘
    • Organizer
      日本脳神経外科学会第74回学術総会
    • Place of Presentation
      北海道札幌市
    • Year and Date
      2015-10-14 – 2015-10-16
    • Invited
  • [Presentation] IDH/TERT変異解析による、グリオーマの分子病理学的層別化:255症例の検討2015

    • Author(s)
      波多江龍亮、秦暢宏、赤木洋二郎、村田秀樹、空閑太亮、吉本幸司、溝口昌弘、飯原弘二
    • Organizer
      日本脳神経外科学会第74回学術総会
    • Place of Presentation
      北海道札幌市
    • Year and Date
      2015-10-14 – 2015-10-16
  • [Presentation] グリオーマ診断における分子病理学の役割2015

    • Author(s)
      溝口昌弘、吉本幸司、村田秀樹、波多江龍亮、赤木洋次郎、天野敏之、飯原弘二
    • Organizer
      第33回日本脳腫瘍病理学会
    • Place of Presentation
      香川県高松市
    • Year and Date
      2015-05-29 – 2015-05-30
  • [Presentation] 神経膠芽腫症例におけるBRAF遺伝子点突然変異解析2015

    • Author(s)
      波多江龍亮、秦暢宏、鈴木諭、赤木洋二郎、村田秀樹、天野敏之、吉本幸司、溝口昌弘、飯原弘二
    • Organizer
      第33回日本脳腫瘍病理学会
    • Place of Presentation
      香川県高松市
    • Year and Date
      2015-05-29 – 2015-05-30

URL: 

Published: 2017-01-06  

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