2016 Fiscal Year Research-status Report
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15K19084
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
鍬田 龍星 山口大学, 共同獣医学部, 学術研究員 (00711219)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 日本脳炎ウイルス / 蚊 / 節足動物媒介感染症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
デング熱やジカ熱、ダニ媒介性脳炎など、蚊やマダニなどが媒介する節足動物媒介ウイルス感染症（アルボウイルス感染症）は世界で広く問題となっている。我が国に常在するアルボウイルスの一つ、日本脳炎ウイルスJapanese encephalitis virus (JEV) は、豚や鳥を増幅動物とし、蚊（主にコガタアカイエカ）によって媒介される。しかし、蚊のJEV感染における分子基盤についてはほとんど明らかになっていない。我々は、JEVの感染機序について研究を行う過程で、JEVエンペロープ（E）蛋白質のRGD領域（JEV_RGD）が、蚊細胞への効率的な感染に重要な役割を担う可能性があることを見出した。そこで本研究では、このJEV_RGDに着目し、（1）その機能の解明と、（2）JEV_RGDと相互作用する蚊細胞受容体の同定を行い、JEVの蚊細胞への感染機序の解明を目指す。前回、JEV_RGDを含むペプチド（23aa）を人工合成し、培養細胞に対する吸着性を調べた結果、合成ペプチドの脊椎動物細胞への吸着は認められたが、蚊細胞への吸着は認められなかった。そこで今年度は、JEVのウイルス様粒子（Virus-like particles; VLPs）を作製し、JEV_VLPのRGD変異体における細胞吸着性について検討した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2009年に宮崎県の感染飼育牛から分離されたJEV/Bo/Miyazaki/1/2009株をベースに、JEV_VLPsを作製することに成功した（JEV_WT）。次に、JEV/Bo/Miyazaki/1/2009株の脊椎動物細胞への連続継代で生じたJEV_RGDの変異体、RGN、RGGに加え、RGD欠損体（ΔRGD）、アラニン置換体（AAA）について、それぞれPCRにより変異を導入し、JEV_VLPsの作製を試みた。その結果、JEV_RGN、JEV_RGG、JEV_AAAについては、遺伝子導入細胞から培養上清中への出芽が認められたが、JEV_ΔRGDについては、遺伝子導入細胞での発現は認められたものの、培養上清中への出芽は認められなかった。次に、作製したJEV_VLPsのうち、JEV_WTおよびJEV_AAAについて、フローサイトメーターを用いてVero細胞（サル腎由来）、C6/36細胞（ヒトスジシマカ由来）、CTR細胞（コガタアカイエカ由来）に対する細胞吸着を調べた。その結果、いずれの組み合わせにおいてもJEV_VLPsの細胞吸着が認められた。
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| Strategy for Future Research Activity |
JEV_VLPsによるアッセイ法を確立することに成功した。JEV_VLPsのRGD領域に変異を導入し、フローサイトメーターで細胞吸着を調べたところ、脊椎動物細胞、蚊細胞のいずれにおいてもJEV_VLPの細胞吸着は認められた。今回は高濃度のJEV_VLPsを供試して細胞への吸着性を確認したので、今後は濃度を検討して解析データを得ることと、セルエライザ法による定量的な解析を行う。また、RGD領域を軸に、変異領域を広げたJEV_VLPs変異体の作製も検討している。
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| Causes of Carryover |
学会参加のための国内旅費を他の研究費より捻出したため
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
試薬等の物品購入に充てる
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[Journal Article] Influenza A virus infection in Japanese wild boars (Sus scrofa leucomystax)2017
Author(s)
Shimoda H, Nguyen DV, Yonemitsu K, Minami S, Nagata N, Hara N, Kuwata R, Murakami S, Kodera Y, Takeda T, Yoshikawa Y, Horimoto T, Maeda K.
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Journal Title
Journal of Veterinary Medical Science
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Simple and specific method for detection of antibodies against hepatitis E virus in mammalian species2016
Author(s)
Yonemitsu K, Terada Y, Kuwata R, Nguyen DV, Shiranaga N, Tono S, Matsukane T, Yokoyama M, Suzuki K, Shimoda H, Takano A, Muto M, Maeda K
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Journal Title
Journal of Virological Methods
Volume: 238
Pages: 56-61
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] Surveillance for mosquito-borne infectious diseases in Asian countries2016
Author(s)
Kuwata R, Supriyono, Kesumawati U, Sugiyama H, Torii S, Minami S, Nagata N, Yonemitsu K, Dung VN, Shimoda H, et al.
Organizer
International Young Scientists’ Symposium in Bogor Agricultural University ‘Fusion of Science to Strengthen Young Scientist Capacity in Achieving the Global Health’
Place of Presentation
ボゴール農科大学（ボゴール・インドネシア）
Year and Date
2016-11-29
Int'l Joint Research
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[Presentation] 東南アジア諸国における蚊保有ウイルスの調査2016
Author(s)
鍬田龍星，杉山弘樹，鳥井駿，高野愛，下田宙，米満研三，小林良祐，Hengjan Y, Phichitraslip T, Prasertsincharoen N, Spriyono, Kesumawati U, Setiyono A, Dargantes AP, Abella JA, Baltazar ET, Simborio LT, Panpiansil J, Agungpriyono S, Rerkamnuaychoke W, 海老原秀喜，本道栄一，前田健
Organizer
第23回トガ・フラビ・ペスチウイルス研究会
Place of Presentation
北海道大学（北海道札幌市）
Year and Date
2016-10-22
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[Presentation] 日本脳炎媒介蚊の吸血活動と遺伝子診断について2016
Author(s)
鍬田龍星、杉山弘樹、米満健三、Simborio LT, Baltazar ET, Abella JA, Dargantes AP, Kesumawati U, Setiyono A, Rerkamnuaychoke W, Prasertsincharoen N, 下田宙、本道栄一、前田健
Organizer
第51回日本脳炎ウイルス生態学研究会
Place of Presentation
リステル猪苗代（福島県那麻郡猪苗代町）
Year and Date
2016-05-13 – 2016-05-14
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