Analysis of Japanese encephalitis virus infection in mosquito cells

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15K19084
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 鍬田 龍星 山口大学, 共同獣医学部, 学術研究員 (00711219)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 蚊 / 感染症 / 日本脳炎ウイルス / フラビウイルス / アルボウイルス

Outline of Annual Research Achievements

日本脳炎ウイルスJapanese encephalitis virus (JEV) は、豚や鳥を増幅動物とし、蚊（主にコガタアカイエカ）によって媒介される節足動物媒介ウイルス感染症（アルボウイルス感染症）である。我々は、JEV感染における蚊の分子基盤を明らかにするため、JEVの蚊細胞への感染機序について解析を行ってきた。
研究を行う過程で、我々は、JEVの粒子を構成するエンペロープ（E）蛋白質のドメインIIIに保存されるアミノ酸RGD配列が、JEVの蚊細胞への効率的な感染に重要な役割を担う可能性があることを見出した。そこで我々は、このJEV_RGD領域に着目し、解析を進めることとした。
まず、発現プラスミドベースで、タグを付与したJEVのウイルス様粒子（Virus-like particles; VLPs）を作製する方法を確立した。次に、このRGD配列に様々な変異を導入し、JEV_VLPの培養細胞吸着性をオリジナル株（RGD株）と比較するためのJEV_VLP変異体の作出を試みた。その結果、RGD配列のDを欠損させた発現プラスミドでは培養細胞からのVLPの出芽が起こらなかった。このことから、JEV_RGDの立体構造がJEVの出芽や粒子形成に重要な役割を持つことが示唆された。RGD配列のD（アスパラギン酸）をN（アスパラギン）やG（グリシン）に置換したJEV_VLPの変異体（JEV_RGN, JEV_RGG）を作出することに成功した。これら変異体の細胞吸着性について、現在、解析を行っている。

Research Products

• [Journal Article] Getah virus epizootic among wild boars in Japan around 2012 (2018)
  • Author(s): Kuwata R, Shimoda H, Phichitraslip T, Prasertsincharoen N, Noguchi K, Yonemitsu K, Minami M, Supriyono, Tran NTB, Takano A, Suzuki K, Nemoto M, Bannai H, Yokoyama M, Takeda T, Jittapalapong S, Rerkamnuaychoke W, Maeda K.
  • Journal Title: Archives of Virology Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Characterization of a novel thogotovirus isolated from Amblyomma testudinarium ticks in Ehime, Japan: A significant phylogenetic relationship to Bourbon virus. (2018)
  • Author(s): Ejiri H, Lim CK, Isawa H, Fujita R, Murota K, Sato T, Kobayashi D, Kan M, Hattori M, Kimura T, Yamaguchi Y, Takayama-Ito M, Horiya M, Posadas-Herrera G, Minami S, Kuwata R, Shimoda H, Maeda K, Katayama Y, Mizutani T, Saijo M, Kaku K, Shinomiya H, Sawabe K
  • Journal Title: Virus Research Volume: 249 Pages: 57-65
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Isolation and characterization of Kabuto Mountain virus, a new tick-borne phlebovirus from Haemaphysalis flava ticks in Japan (2018)
  • Author(s): Ejiri H, Lim CK, Isawa H, Yamaguchi Y, Fujita R, Takayama-Ito M, Kuwata R, Kobayashi D, Horiya M, Posadas-Herrera G, Iizuka-Shiota I, Kakiuchi S, Katayama Y, Hayashi T, Sasaki T, Kobayashi M, Morikawa S, Maeda K, Mizutani T, Kaku K, Saijo M, Sawabe K
  • Journal Title: Virus Research Volume: 244 Pages: 252-261
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Isolation and characterization of Tarumizu tick virus: A new coltivirus from Haemaphysalis flava ticks in Japan (2018)
  • Author(s): Fujita R, Ejiri H, Lim CK, Noda S, Yamauchi T, Watanabe M, Kobayashi D, Takayama-Ito M, Murota K, Posadas-Herrera G, Minami S, Kuwata R, Yamaguchi Y, Horiya M, Katayama Y, Shimoda H, Saijo M, Maeda K, Mizutani T, Isawa H, Sawabe K
  • Journal Title: Virus Research Volume: 242 Pages: 131-140
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] The genetic diversity of D-loop sequences in eastern bent-winged bats (Miniopterus fuliginosus) living in Wakayama Prefecture, Japan (2017)
  • Author(s): Iida K, Kobayashi R, Hengjan Y, Nagata N, Yonemitsu K, Nunome M, Kuwata R, Suzuki K, Ichiyanagi K, Maeda K, Ohmori Y, Hodo E
  • Journal Title: Journal of Veterinary Medical Science Volume: 79(6) Pages: 1142-1145
  • DOI: doi: 10.1292/jvms.17-0152. Epub 2017 May 8.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Epidemiological study of relapsing fever borreliae detected in Haemaphysalis ticks and wild animals in the western part of Japan (2017)
  • Author(s): Furuno K, Lee K, Itoh Y, Suzuki K, Yonemitsu K, Kuwata R, Shimoda H, Watarai M, Maeda K, Takano A
  • Journal Title: PLoS One Volume: 12(3) Pages: e0174727
  • DOI: doi: 10.1371/journal.pone.0174727. eCollection 2017
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Presentation] Surveillance of mosquito-borne arboviruses infection in Asian countrie (2018)
  • Author(s): Kuwata R
  • Organizer: Central Mindanao University Research Seminar
  • Invited
• [Presentation] A recent Getah virus outbreak in Japan was occurred during 2012 (2017)
  • Author(s): Kuwata R, Shimoda H, Bannai H, Nemoto M, Phichitraslip T, Prasertsincharoen N, Supriyono, Minami S, Nagata N, Yonemitsu K, Noguchi K, Takano A, Jittapalapong S, Rerkamnuaychoke W, Maeda K
  • Organizer: The 65th Annual Meeting of the Japanese Society for Virology
• [Presentation] Analysis of the endogenous virus-like sequences in mosquito genome (2017)
  • Author(s): Torii S, Kuwata R, Supriyono, Noguchi K, Nagata N, Minami S, Yonemitsu K, Shimoda H, Kesumawati U, Itokawa K, Isawa H, Sawabe K, Maeda K
  • Organizer: The 65th Annual Meeting of the Japanese Society for Virology
• [Presentation] アジアにおけるゲタウイルスの蔓延状況 (2017)
  • Author(s): 鍬田龍星,下田宙，根本学，坂内天，Phichitraslip T，Prasertsincharoen N，Supriyono，南昌平，米満研三，野口慧多，Jittapalapong S， Rerkamnuaychoke W，Bazartseren B，前田健
  • Organizer: 第24回トガ・フラビ・ペスチウイルス研究会
• [Presentation] アジアにおける蚊媒介性ウイルスの調査 (2017)
  • Author(s): 鳥井駿，鍬田龍星，Supriyono，Tran NTB，野口慧多，南昌平，米満研三，下田宙，Phichitraslip T，Prasertsincharoen N， Kesumawati U， Baltazar ET， Agungpriyono S， Rerkamnuaychoke W， Bazartseren B，本道栄一，前田健
  • Organizer: 第24回トガ・フラビ・ペスチウイルス研究会
• [Presentation] ゲタウイルスならびに日本脳炎ウイルスの血清疫学調査 (2017)
  • Author(s): 鍬田龍星,下田宙，坂内天，根本学， Phichitraslip T，Prasertsincharoen N，Supriyono，南昌平，長田奈緒，米満研三，野口慧多，Jittapalapong S， Rerkamnuaychoke W，前田健.
  • Organizer: 第160回日本獣医学会学術集会
• [Presentation] アジアにおける蚊媒介性ウイルスの調査 (2017)
  • Author(s): 鳥井駿，鍬田龍星，Supriyono，下田宙，Phichitraslip T，Prasertsincharoen N， Kesumawati U， Baltazar ET， Agungpriyono S， Rerkamnuaychoke W， Bazartseren B，本道栄一，前田健
  • Organizer: 第160回日本獣医学会学術集会
• [Presentation] Detection and isolation of tick-borne bacteria (Rickettsia spp., Anaplasma spp., Ehrlichia spp. and Borrelia spp.) in Aponomma lucasi ticks collected from Lizard (Varanus salvator) in Indonesia (2017)
  • Author(s): Supriyono, Takano A, Kuwata R, Shimoda H, Torii S, Minami S, Nagata N, Yonemitsu K, Phichitraslip T, Prasertsincharoen N, Dargantes AP, Abella JA, Baltazar ET, Simborio LT, Panpiansil J, Rerkamnuaychoke W, Ebihara H, Hadi UK, Setiyono A, Agungpriyono S, Hondo E, Maeda K.
  • Organizer: 第160回日本獣医学会学術集会
• [Presentation] シュルツェマダニ（Ixodes persulcatus）における転写制御因子の発現解析 (2017)
  • Author(s): 伊藤幸枝、高野愛、鍬田龍星、中尾稔、下田宙、前田健
  • Organizer: 第160回日本獣医学会学術集会
• [Presentation] 山口捕集蚊から分離された新規RNAウイルスの遺伝子発現機構 (2017)
  • Author(s): 鍬田龍星、鳥井駿、野口慧多、米満研三、南昌平、長田奈緒、Spriyono、Tran NTB、下田宙、高野愛、前田健
  • Organizer: 第33回中国四国ウイルス研究会
• [Presentation] 蚊のゲノムにみられる内在性ウイルス様配列の解析 (2017)
  • Author(s): 鳥井駿、鍬田龍星、Supriyono、野口慧多、長田奈緒、南昌平、米満研三、下田宙、Kesumawati U、糸川健太郎、伊澤晴彦、沢辺京子、前田健
  • Organizer: 第33回中国四国ウイルス研究会
• [Presentation] 本州におけるダニ媒介性フラビウイルスの侵潤状況の調査 (2017)
  • Author(s): 下田宙、水野純子、米満研三、南昌平、長田奈緒、Supriyono、野口慧多、鍬田龍星、高野愛、前田健
  • Organizer: 第33回中国四国ウイルス研究会
• [Presentation] 本邦イノシシにおける日本脳炎ウイルス・ゲタウイルス感染の血清疫学調査 (2017)
  • Author(s): 鍬田龍星，下田宙，杉山弘樹，Phichitrasilp T，Nuansri N， Khomkrajang S， Srinivat T， Buadok W，Prasertsincharoen N， Jittapalapong S， Rerkamnuaychoke W，前田健
  • Organizer: 第69回日本衛生動物学会大会
• [Presentation] 国内におけるダニ媒介性ウイルスの感染環の調査 (2017)
  • Author(s): 下田宙，水野純子，Nguyen DV，米満研三，南昌平，長田奈緒，鍬田龍星，高野愛，前田健
  • Organizer: 第69回日本衛生動物学会大会