抗デングウイルス化合物を用いたウイルス複製機構の解析

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K19109
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• Principal Investigator: 日紫喜 隆行 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 主任研究員 (30535761)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: デングウイルス / ケミカルバイオロジー / 抗ウイルス化合物

Outline of Annual Research Achievements

本研究ではケミカルバイオロジー的手法を用いてデングウイルス複製に関与する宿主因子を同定し、ウイルス複製制御機構を明らかにすることを目的としている。今年度は昨年度フォーカスアッセイによって絞り込んだ抗ウイルス候補化合物についてさらに詳細な解析を行った。まず、候補化合物を全ての血清型（1型から4型）感染性デングウイルスとそれぞれ3日間共培養し、その後培養上清中に放出されたウイルス力価をプラークアッセイによって解析した。その結果、フォーカスアッセイ同様顕著な抗デングウイルス活性が認められた。また、Time of drug additionアッセイおよび一過性レポーターレプリコンの系を用いた解析から、候補化合物の作用点はウイルス生活環のなかで翻訳とゲノム増幅の間の過程であることが示唆された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

抗ウイルス化合物の探索および同定に成功し、さらに作用点の絞り込みまで行えたことから、デングウイルス複製制御機構の解明に向けて着実に前進している。

Strategy for Future Research Activity

siRNAによって候補化合物のターゲット因子の発現を抑制し、ウイルス複製への関与を解析する。また、候補化合物耐性ウイルスを樹立し解析することによって抗ウイルス化合物の標的宿主因子を明らかにし、宿主因子によるウイルス複製制御機構の解明を試みる。

Causes of Carryover

各解析を進めていく中でsiRNAや抗体の反応性が期待を下回るものであったため再購入する必要が生じた。また、年度内に論文が受理されなかったことから計上していた論文掲載費を次年度使用することにした。

Expenditure Plan for Carryover Budget

各種試薬（siRNAや抗体など）および論文の掲載費として使用する。

Research Products

• [Journal Article] Novel antiviral activity of bromocriptine against dengue virus replication. (2016)
  • Author(s): Kato Fumihiro, Ishida Yuki, Oishi Shinya, Fujii Nobutaka, Watanabe Satoru, Vasudevan Subhash, Tajima Shigeru, Takasaki Tomohiko, Suzuki Yoichi, Ichiyama Koji, Yamamoto Naoki, Yoshii Kentaro, Takashima Ikuo, Kobayashi Takeshi, Miura Tomoyuki, Igarashi Tatsuhiko, Hishiki Takayuki.
  • Journal Title: Antiviral Res. Volume: 12 Pages: 141-7
  • DOI: 10.1016/j.antiviral.2016.04.014
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Dengue Virus Reporter Replicon is a Valuable Tool for Antiviral Drug Discovery and Analysis of Virus Replication Mechanisms. (2016)
  • Author(s): Kato Fumihiro, and Hishiki Takayuki.
  • Journal Title: Viruses. Volume: 8 Pages: 122
  • DOI: 10.3390/v8050122
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Development of dengue virus replicon cells expressing secretory luciferase (2016)
  • Author(s): Takayuki Hishiki, Fumihiro Kato, Shigeru Tajima, Tomoyuki Miura, Tatsuhiko Igarashi, Tomohiko Takasaki, Michinori Kohara
  • Organizer: 第64回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター（北海道札幌市）
  • Year and Date: 2016-10-23 – 2016-10-25
• [Presentation] 分泌型ルシフェラーゼを発現するデングウイルスレプリコン細胞の樹立 (2016)
  • Author(s): 日紫喜隆行、加藤文博、田島茂、三浦智行、五十嵐樹彦、高崎智彦、小原道法
  • Organizer: 第23回トガフラビペスチウイルス研究会
  • Place of Presentation: 北海道大学（北海道札幌市）
  • Year and Date: 2016-10-22 – 2016-10-22
• [Presentation] Bromocriptine is a novel inhibitor of dengue virus replication (2016)
  • Author(s): Takayuki Hishiki, Fumihiro Kato, Yuki Ishida, Shinya Oishi, Satoru Watanabe, Subhash G. Vasudevan, Shigeru Tajima, Tomohiko Takasaki, Tomoyuki Miura, and Tatsuhiko Igarashi
  • Organizer: 4th Antivirals Congress
  • Place of Presentation: Barcelona (Spain)
  • Year and Date: 2016-09-18 – 2016-09-21
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] デングウイルス1型レポーターレプリコン細胞の樹立 (2016)
  • Author(s): 日紫喜隆行、加藤文博、田島茂、三浦智行、五十嵐樹彦、高崎智彦
  • Organizer: 第51回日本脳炎ウイルス生態学研究会
  • Place of Presentation: ホテルリステル猪苗代（福島県耶麻郡）
  • Year and Date: 2016-05-13 – 2016-05-14
• [Book] Hepatitis C Virus I (2016)
  • Author(s): Hishiki Takayuki, Shimizu Yuko, Ujino Saneyuki, Nishitsuji Hironori, Shimotohno Kunitada.
  • Total Pages: 18
  • Publisher: Springer book
• [Patent(Industrial Property Rights)] 抗デングウイルス剤及びそのスクリーニング方法 (2016)
  • Inventor(s): 日紫喜隆行、加藤文博、石田裕樹
  • Industrial Property Rights Holder: 日紫喜隆行、加藤文博、石田裕樹
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Industrial Property Number: 特願2016-140294
  • Filing Date: 2016-07-15
  • Acquisition Date: 2016-07-29