2015 Fiscal Year Research-status Report
グルココルチコイド受容体の遺伝子多型が血管透過性に及ぼす影響に関する検討
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15K19658
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Research Institution | Fukushima Medical University |
Principal Investigator |
小笠原 啓 福島県立医科大学, 医学部, 病院助手 (00510348)
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Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | グルココルチコイド / HUVEC / SNP / 血管透過性 |
Outline of Annual Research Achievements |
網膜内皮細胞などでは、glucocorticoid(GC)がglucocorticoid receptor(GR)を介してタイトジャンクションのtightningを起こすことで血管透過性の抑制していることが証明されている。しかし、血管内皮細胞では血管透過性の抑制機序が不明である。 今回は、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)を用い、さらに同児のGRの一塩基遺伝子多型(SNP)も検査し、ハイドロコルチゾン投与前後での経上皮内皮電気抵抗値(TER)の変化を調べる。それにより、ハイドロコルチゾンが血管透過性を改善させることを証明し、さらにGRのSNPがそれらに及ぼす影響を調べることが研究の目的である。 研究の流れは、大きく分けて3つに分かれる。①HUVECの単離培養:当施設で出生した早産児より臍帯を提供して頂き、HUVECを単離培養する。②臍帯血DNAからのGRのSNP解析:DNAを分離後、TaqMan法を用い、GRに関して報告されている既知4種のSNP解析を行う。③HUVECの細胞透過性の測定:ハイドロコルチゾン投与前後の細胞透過性を細胞リアルタイムモニタリングシステム( cellZscope® ) により、経上皮内皮電気抵抗値(TER)を経時的に測定する。 初年度は、16症例のHUVEC、臍帯血を採取した。16症例の内訳は、24週:1例、28週:2例、29週1例、31週:1例、33週:1例、36週:2例、37週:1例、38週:7例となっている。採取した16症例のHUVECは継代し、そのうちの6症例に関し、TERの経時的な測定を行い、在胎週数の違いにより血管透過性の差異が生じるかどうかを検討したが、有意な差は認めなかった。また、臍帯血のSNP解析はまだ行っていない。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
早産児のHUVECは、24週:1例、28週:2例、29週1例、31週:1例、33週:1例の計6症例が採取できた。目標は早産児20症例なので、まだ目標に達していない。しかし、在胎24週の細いHUVECが採取できることがわかった。 TER測定では本来、ハイドロコルチゾン投与前後での抵抗値測定を行う予定であったがまだできていない。 臍帯血を用いたGRのSNP解析ができていない。
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Strategy for Future Research Activity |
まず、早産児、特に30週未満の児のHUVEC及び臍帯血の採取を積極的に行う。目標は早産児20症例だが、SNP解析を行うには、本来ならば100症例以上を必要とする。しかし、現実的に平成28年度、29年度で後50症例の30週未満の児の検体採取を行う。 平成28年度に採取したHUVECを用い、ハイドロコルチゾン投与前後でのTERの測定を行う。そしてSNP解析を行い、特にBclⅠ多型での違いがTERに影響を及ぼすかどうかを検討する。最後に、TER測定で血管透過性が高かった児が、出生後に浮腫を起こしたか、低血圧 になったかなど実際の臨床経過とリンクさせることも検討している。
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Causes of Carryover |
当初予定していたよりもHUVEC、臍帯血の検体数が集まらなかったため、備品の請求が当初よりも少なくなってしまった。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
前年度に研究が進まなかった分、HUVECの採取とTER測定を進める。また、臍帯血を用いたグルココルチコイド受容体の遺伝子多型解析を進める。、
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