2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of evaluation methods for the potency of fish vaccine by simple and sensitive determination of the function of cell-mediated immunity
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16H04984
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
中西 照幸 日本大学, 生物資源科学部, 研究員 (00322496)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
間野 伸宏 日本大学, 生物資源科学部, 准教授 (10339286)
杣本 智軌 九州大学, 農学研究院, 准教授 (40403993)
高野 倫一 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 増養殖研究所, 研究員 (40533998)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 魚類 / クローンギンブナ / 細胞性免疫 / リンパ球 / ワクチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.細胞性免疫関連分子の活性に基づいた細胞性免疫機能測定法の開発：ノカルジア症に感染耐過したカンパチ由来の白血球をマイトジェンで刺激しウェスタンブロッティング法により解析したところ、カンパチIFNγの分子量と一致するバンドが検出された。一方、無刺激の白血球からは検出されなかった。また、ノカルジア症感染耐過カンパチの白血球培養上清から免疫沈降法においてもIFNγが検出された。以上より、IFNγの産生を指標としてノカルジア症に対する細胞性免疫誘導を評価できることが明らかとなった。
2.鰭膜内接種法による細胞性免疫機能測定法の開発：抗原（ZymosanとStaphylococcus aureus）の違いにより、集積する細胞の種類や貪食率が異なることが明らかとなった。PHAの鰭膜内への投与により、鰭膜においてリンパ球、顆粒球及びマクロファージの増加が認められた。以上のことから、PHA投与によりin vivoにおける局所への白血球の浸潤並びに局所免疫反応と全身性免疫反応を観察できることが魚類において初めて明らかとなった。なお、鳥類や両生類で報告されているような顕著な二次応答は認められなかった。
3.リンパ球による殺菌活性を指標とした細胞性免疫機能測定法の開発：これまでに白点病の病原体であるIchthyophthirius multifilis（白点虫）に対してCD8陽性Tリンパ球が傷害活性を示すことを明らかにしてきたが、本年度は白点虫への腎臓及び鰓由来の白血球の遊走活性を比較した。その結果、マクロファージや好中球は白点虫への遊走を示さず、腎臓由来のCD8陽性Tリンパ球のみが遊走能を示した。また、セロントではなくトロフォントを鰭膜内に注射した場合のみ、CD4+細胞及びCD8細胞の割合が、GATA3およびT-betのmRNA発現量が有意に上昇し、Tリンパ球が活性化することが明らかになった。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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