2017 Fiscal Year Research-status Report
分子標的を用いた癌早期発見と癌二次予防の前臨床研究
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16K07141
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高橋 淳 京都大学, 医学研究科, 客員研究員 (80303840)
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| Project Period (FY) |
2016-10-21 – 2019-03-31
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| Keywords | 遺伝子改変マウス / 癌予防 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
腫瘍促進因子FEATタンパクがほとんどのヒト癌の細胞質で異常に増加し、患者の血中に漏出していることを見出した。この発見に基づいて、血中FEATを高感度で検出して癌化を早期発見し、FEAT活性を阻害する薬剤で癌化を停止する方法論を着想した。
FEATの欠失で発癌が抑制されるかを明らかにするために、コンディショナル・ノックアウトマウスを作出する。International Mouse Phenotype Consortium（IMPC）のKnockout-Mouse Program (KOMP) よりターゲティングベクターを購入し、がん研究ネットワークメンバーに対する「個体レベルでのがん研究支援活動」の協力を得て、マウスES細胞に導入し、240個のneo耐性ES細胞を拾い上げ、PCRで27クローンが陽性で、サザンブロッティングで4クローンの相同組換えES細胞を同定した。
2クローン（#7, #144）のES細胞をマウス胚盤胞期胚へ注入し仮親の子宮へ移植してキメラ率5-10%のオスのキメラマウス（#7, 7匹、#144, 3匹）を得た。精子を人工授精で正常C57BL/6系統と交配したが、#7系統より生まれた441匹、#144系統より生まれた183匹は全てブラックで、agoutiは1匹も得られなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
FEATノックアウトマウス作出は、Mettl13+/－マウスが不妊で成功しなかった。コンディショナル・ノックアウトマウス作出は、現在までのところ成功していない。原因はES細胞の質が低いためと考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
ES細胞の質が低い技術的問題を克服するために、株式会社トランスジェニック社に受託し、生殖系列移行効率が高く戻し交配（backcross）不要なRENKA株のES細胞を用いて、コンディショナル・ノックアウトマウスを作出する。相同組換えの起ったES細胞の作出、マウス胚盤胞期胚への注入によるキメラマウスの作製、ヘテロマウスの作製までを同社で行う。
さらに、株式会社KACに受託して、ヘテロマウスの精子を凍結保存し、ヘテロ接合型マウスの雌雄を交配してホモ接合型（Mettl13flox/flox）マウスを得る。
このコンディショナルノックアウトマウスを組織特異的Cre発現マウスと交配し、発現型を組織像の顕微鏡観察、血液の生化学検査で解析する。発癌モデルマウスと交配するために、複数の研究者に共同研究を提案する。
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[Journal Article] A phase I clinical trial of RNF43 peptide-related immune cell therapy combined with low-dose cyclophosphamide in patients with advanced solid tumors.2018
Author(s)
Hijikata Y, Okazaki T, Tanaka Y, Murahashi M, Yamada Y, Yamada K, Takahashi A, Inoue H, Kishimoto J, Nakanishi Y, Oda Y, Nakamura Y, Tani K
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Journal Title
PLoS One
Volume: 13
Pages: e0187878
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Therapeutic vaccination based on side population cells transduced by the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor gene elicits potent antitumor immunity.2017
Author(s)
Sakamoto C, Kohara H, Inoue H, Narusawa M, Ogawa Y, Hirose-Yotsuya L, Miyamoto S, Matsumura Y, Yamada K, Takahashi A, Tani K
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Journal Title
Cancer Gene Ther.
Volume: 24
Pages: 165-174
DOI
Peer Reviewed
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