2017 Fiscal Year Research-status Report
翻訳後修飾によるヘムオキシゲナーゼの機能調節とその破綻による疾患発症との関係
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16K07307
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
東元 祐一郎 久留米大学, 医学部, 教授 (40352124)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂口 達也 久留米大学, 医学部, 助教 (00757031)
松井 孝憲 久留米大学, 医学部, 講師 (10425233)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | ヘムオキシゲナーゼ / 翻訳後修飾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヘムオキシゲナーゼ(HO)は、生体内で代謝的にCOを発生する酵素として知られているが、過剰のCO生成は生体毒となるため、HO活性は厳密に制御されていると考えられる。これまでHOは、ミクロソーム酵素として知られていたが、前年までも研究結果において、各種刺激（Hemin, Hypoxia, LPS）によって、ミトコンドリア、核、カベオラなど、種々の細胞内小器官に局在することが明らかになった。今年度は、核に移行したHOの翻訳後修飾に着目して研究を進めた。核に移行するタンパク質の多くは、リジン残基がアセチル化されることが知られている。そこで、NIH3T3をHypoxiaで刺激した後、免疫沈降法によってHO-1を単離し、Peptide-Mass-Fingerprinting法を行った。その結果、Lys243とLys256がアセチル化されていることが明らかになった。さらに、核に局在するHO-1は膜結合部分が排除されていることも確認された。HEK293細胞にHO-1とp300, CREB-biding protein(CBP)をトランスフェクトし、HO-1特異的抗体で免疫沈降すると、p300, CREB-biding protein(CBP)が共沈してくることを明らかにした。逆にP300, p300, CREB-biding protein(CBP)の特異的抗体で免疫沈降すると、HO-1が共沈してくることも併せて確認された。Lys243は、前年までの研究結果において、ユビキチン化される残基でもあり、この残基を変異させたHO-1を作成し、その機能について検討中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初、翻訳後修飾の有無に着目して検討する予定だったが、前年度の結果によって、HOは各種刺激に応答して、核やカベオラなど、各種細胞小器官に広く局在することが明らかになった。今年度は、その局在移行に関わる翻訳後修飾の１つとして、核内タンパク質のアセチル化に着目して研究を進めた。
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| Strategy for Future Research Activity |
HOが様々な刺激によって、局在が変化することが明らかになったため、その局在移行に関与する翻訳後修飾を明らかにしていく予定である。さらに、その翻訳後修飾がHOの機能ならびに、生理機能にどのように関係しているのかについて検討を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
当初予定していた研究計画から若干の修正を行ったため、使用予定だった抗体量および質量分析用の試薬量に変更が生じたため
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[Journal Article] RAGE-aptamer attenuates deoxycorticosterone acetate/salt-induced renal injury in mice.2018
Author(s)
aguchi K, Yamagishi SI, Yokoro M, Ito S, Kodama G, Kaida Y, Nakayama Y, Ando R, Yamada-Obara N, Asanuma K, Matsui T, Higashimoto Y, Brooks CR, Ueda S, Okuda S, Fukami K.
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Journal Title
Sci. Rep.
Volume: 8
Pages: 2686-2698
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] RAGE-aptamer Blocks the Development and Progression of Experimental Diabetic Nephropathy.2017
Author(s)
Matsui, T., Higashimoto, Y., Nishino, Y., Nakamura, N., Fukami, K., Yamagishi, S.
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Journal Title
Diabetes
Volume: 66
Pages: 1683-1695
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Methylglyoxal-derived hydroimidazolone-1 evokes inflammatory reactions in endothelial cells via an interaction with RAGE.2017
Author(s)
Ishibashi, Y., Matsui, T., Nakamura, N., Sotokawauchi, A., Higashimoto, Y., Yamagishi, S.
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Journal Title
Diabetes Vasc. Dis. Res.
Volume: 14
Pages: 450-453
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] RAGE-aptamer inhibits the growth and liver metastasis of melanoma in nude mice.2017
Author(s)
Nakamura, N., Matsui, T., Ishibashi, Y., Sotokawauchi, A., Fukami, K., Higashimoto, Y., Yamagishi, S.
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Journal Title
Mol. Med.
Volume: 23
Pages: 295-306
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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