Enrichment of fungal genetic resources by developing spore isolation method and culture preservation method for ectomycorrhizal mushrooms

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K08111
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 中桐 昭 鳥取大学, 農学部, 教授 (70198050)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 菌根性きのこ / 胞子分離 / 凍結保存 / 遺伝資源

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、難培養性とされる菌根性きのこ（担子菌類および子嚢菌類）の培養法として胞子発芽誘導法を開発し、培養法を改良して多様なきのこ培養株を樹立し、さらに、菌株の凍結保存法を開発することによって、新たな生物資源を開発することを目的として実施した。2018年度の研究実績の概要は以下の通り。
１．菌根性担子菌類の子実体（きのこ）を野外から収集し、その子実体から得られた担子胞子を分離源とし、これまでの研究実績に基づき、MNC培地、ゲランガムMNC培地、n-酪酸添加MNC培地、YMG培地を分離用培地として適宜用いて胞子分離を行い、Amanita属17種21株，Entoloma属1種1株，Hydnellum属3種4株，Hydnum属9種37株，Laccaria属3種3株，Sarcodon属2種2株，Tricholoma属4種4株の合計72株の培養株の樹立に成功した。
２．2018年度の分離株に加え、2016～2017年度の分離株を用いて、菌糸成長に好適な培地を検討したところ、菌根性きのこ類の属や節レベルの分類群ごとに、好適な培地が明らかになってきた。汎用性の高い培地としてMNC培地があげられるが、一部の菌では、2％MA培地やYG培地、1/4YMG培地が適していることが明らかになった。
３．菌株の凍結保存は、菌糸成長に好適な液体培地をバーミキュライトに染み込ませたものを培養基材として菌糸を培養した後に、凍結保護剤（5% DMSO+10% Trehalose)を用いて、プログラムフリージング（-1℃/min)して、液体窒素気相タンクで保存した。培養株が得られ、TUFC菌株として登録した266株のうち197株の凍結保存が完了した。残りの69株のうち6株は死滅したために廃棄した。他の63株は現在、凍結保存の完了を目指して、凍結前の前培養での培地の検討や培養法の改良、復元方法の改良を行っている。

Research Products

• [Journal Article] Modified perlite protocol with a mixed dimethyl sulfoxide and trehalose cryoprotectant improves the viability of frozen cultures of ectomycorrhizal basidiomycetes. (2019)
  • Author(s): Sato, M., Inaba, S., Sukenobe, J., Sasaki, T. Inoue, R., Noguchi, M., Nakagiri, A.
  • Journal Title: Mycologia Volume: 111 Pages: 161-176
  • DOI: 10.1080/00275514.2018.1520035
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Establishment of monokaryotic and dikaryotic isolates of Hedgehog mushrooms (Hydnum repandum and related species) from basidiospores. (2019)
  • Author(s): Sugawara, R., Yamada, A., Kawai, M., Sotome, K., Maekawa, N., Nakagiri, A., Endo, N.
  • Journal Title: Mycoscience Volume: 60 Pages: -
  • DOI: 10.1016/j.myc.2019.02.007
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] First successful isolation of Entoloma clypeatum species complex from basidiospores. (2019)
  • Author(s): Shishikura, M., Sugawara, R., Takemura, Y., Sotome, K., Maekawaa, N., Nakagiri, A., Endo, N.
  • Journal Title: Mycoscience Volume: 60 Pages: -
  • DOI: 10.1016/j.myc.2019.02.011
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 菌根性テングタケ属（Amanita）菌の遺伝資源菌株の拡充に向けた胞子分離法の改良． (2018)
  • Author(s): 菅原遼，中桐昭，早乙女梢，前川二太郎，遠藤直樹．
  • Organizer: 日本微生物資源学会第25回大会
• [Presentation] Technique for Preservation and Evaluation of Mushroom Cultures. (2018)
  • Author(s): Nakagiri, A.
  • Organizer: Pre-Workshop of 1st Symposium on Mushroom Research and Cultivation Technology, Pathum Thani, Thailand.
  • Invited
• [Presentation] Mushroom culture collection. (2018)
  • Author(s): Nakagiri, A.
  • Organizer: 1st Symposium on Mushroom Research and Cultivation Technology: Progress & Challenges、Bangkok, Thailand
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] 菌類培養株の保存 －難培養性菌株の凍結保存法改良―． (2018)
  • Author(s): 中桐昭．
  • Organizer: Cryopreservation Conference 2018, 岡崎コンファレンスセンター、岡崎市．
• [Presentation] キシメジ属きのこの担子胞子および外生菌根からの分離培養． (2018)
  • Author(s): 菅原遼，早乙女梢，中桐昭，前川二太郎，山田明義，遠藤直樹．
  • Organizer: 日本産カノシタ属（Hydnum)の分類学的再検討．日本菌学会第62回大会
• [Presentation] 日本産ハルシメジ類の分類学的再検討． (2018)
  • Author(s): 宍倉愛実，竹村圭弘，早乙女梢，中桐昭，前川二太郎，山田明義，遠藤直樹．
  • Organizer: 日本菌学会第62回大会，