2016 Fiscal Year Research-status Report
脂質メディエーター結合タンパク質の網羅的同定と生理機能の解明
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16K08596
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
奥野 利明 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60361466)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 脂質生化学 / ケミカルバイオロジー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生体内には多彩な脂質メディエーターが存在し、多種多様な生理機能を発揮することが明らかにされている。特に近年、質量分析機の革新的な進歩によって、ごく微量に存在する新規の生理活性脂質が同定されている。しかしながら、生理活性脂質の中には、受容体、輸送体、代謝酵素などの結合タンパク質が未同定な分子も多く存在する。本研究は、ケミカルバイオロジーの手法を用いて脂質メディエーターの新規結合タンパク質を同定し、脂質メディエーターの新しい生理機能や制御機構を明らかにすることを研究目的とする。
本年度は、脂質メディエーターとジアジドプローブをアミド結合させた脂質プローブが機能するかを、より簡単な構造を有する脂質であるアラキドン酸(AA)とエイコサペンタエン酸(EPA)を用いて検討した。ジアジド基を有するプローブをアラキドン酸、またはEPAにアミド結合させ、HEK293細胞に添加することで、標的とするタンパク質と特異的に結合するかの検討を行った。
HEK293細胞にアラキドン酸プローブ、またはEPAプローブを添加後、UV照射を行い、標的タンパク質と結合させた。細胞を溶解させた後、クリック反応でアジド基をCy5-アルキンと結合させ、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。Cy5の蛍光を蛍光イメージャーで取得したところ、脂質プローブを添加させたサンプルで比較的濃いバンドを検出することができた。したがって、作成した脂質プローブがきちんと機能していることがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
脂質メディエーターのケミカルプローブ作成まで達成したかったが、条件検討に時間を有しているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
脂質プローブの有効性の検証を速やかに実施し、脂質メディエーターのケミカルプローブ作成に取り掛かる。
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| Causes of Carryover |
当初の計画まで研究が進展しなかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
消耗品の購入に充て、研究を進展させる。
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Research Products
(14 results)
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[Journal Article] chiki T, Koga T, Okuno T, Saeki K, Yamamoto Y, Yamamoto H, Sakaguchi M, Yokomizo T. Modulation of leukotriene B4 receptor 1 signaling by receptor for advanced glycation end products (RAGE).2016
Author(s)
Ichiki T, Koga T, Okuno T, Saeki K, Yamamoto Y, Yamamoto H, Sakaguchi M, Yokomizo T.
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Journal Title
FASEB J
Volume: 30
Pages: 1811-1822
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Leukotriene B4 receptor type 2 protects against pneumolysin-dependent acute lung injury.2016
Author(s)
Shigematsu M, Koga T, Ishimori A, Saeki K, Ishii Y, Taketomi Y, Ohba M, Jo-Watanabe A, Okuno T, Harada N, Harayama T, Shindou H, Li J D, Murakami M, Hoka S, Yokomizo T.
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Journal Title
Sci Rep
Volume: 6
Pages: 34560
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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