2016 Fiscal Year Research-status Report
肝幹細胞由来の細胞外小胞を用いた新たな急性肝不全治療の研究
| Project/Area Number |
16K09338
|
|---|
| Research Institution | Yamagata University |
|---|
Principal Investigator |
芳賀 弘明 山形大学, 医学部, 助教 (70466613)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
邵 力 山形大学, 大学院医学系研究科, 助教 (80344787)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
|
| Keywords | Extracellular Vesicles / 肝幹細胞 / 間葉系幹細胞 / 急性肝不全 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
劇症肝炎を含む急性肝不全は死亡率が高く、肝臓移植に代わる治療の開発が待たれているが、まだ、十分な効果のある治療法は開発されていない。
細胞から放出される細胞外小胞であるExtracellular vesicles(EV) 内にはprotein、RNA、DNAなどが含まれており、細胞間のコミュニケーションに重要な役割を持っていると考えられている。私たちは肝幹細胞や間葉系幹細胞由来のEVを用いた急性肝不全の治療の開発を目指している。
平成28年度は間葉系幹細胞および肝幹細胞のそれぞれの培養液から、Ultracentrifugation法にてExtracellular Vesicles(EV)の採取を行い、それらのEVをナノ粒子解析装置やexosomeマーカーの検討からexosomeの豊富なEVであることが判明した。
さらに、D-galactosamine＋TNF-αを腹腔内投与し急性肝不全マウスモデルを作成したが、それらのマウスは7時間前後に急性肝不全で死亡することを確認した。その後、急性肝不全マウスモデルに間葉系幹細胞由来のEV（MSC-EV)またはPBSを尾静脈投与し、1時間、3時間、6時間後にsacrificeし肝臓および血液を採取し、肝組織学および血液生化学検査を行った。MSC-EV群はコントロー群（PBS）に比べ有意に肝機能を改善させ、肝組織の壊死やアポトーシスを改善させることがわかった。今後は、肝幹細胞由来のEVの急性肝不全マウスモデルへの効果について検討し、さらにEV内のmicroRNAやlong noncording RNAを解析し、急性肝不全に対するEVのメカニズムを解明する予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ヒトの肝幹細胞採取が困難であったため、マウスの肝幹細胞を使用することとしたが、培養液に添加する増殖因子（HGFおよびEGF）の濃度や培養時間の検討に時間がかかってしまい、肝幹細胞由来のEVを採取するのに時間を要した。そのため、まだ、肝幹細胞由来のEVの急性肝不全マウスモデルへの投与の検討は行われていない。しかし、肝幹細胞由EVの採取は平成28年度中に終わっているため、平成29年度初旬には肝幹細胞由EVの急性肝不全マウスモデルへの投与の検討を行う予定である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
新年度は、肝幹細胞由来EVを急性肝不全マウスモデルへ投与する検討を行う。さらに間葉系幹細胞や肝幹細胞由来のEV内のRNAを抽出し、microRNAやlong noncording RNAの解析を行い、肝再生に関与する因子をしぼりこむ予定である。また、肝細胞障害モデル(in vitro)において、それらのRNAが肝再生のメカニズムに関与しているか検討する方針である。
|
| Causes of Carryover |
肝幹細胞由のEVの採取が遅れたため、平成28年度予定であった肝幹細胞由EVの急性肝不全マウスモデルへの投与の検討は平成29年度に行うことになり、試薬が平成29年度に持ち越しとなったため。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成29年度に次年度使用額を用いて、免疫染色の抗体を購入し、肝幹細胞由EV投与後の急性肝不全マウスの検討を行う予定である。
|
-
-
[Journal Article] MiR-139-5p is associated with inflammatory regulation through c-FOS suppression, and contributes to the progression of primary biliary cholangitis.2016
Author(s)
Katsumi T, Ninomiya M, Nishina T, Mizuno K, Tomita K, Haga H, Okumoto K, Saito T, Shimosegawa T, Ueno Y.
-
Journal Title
Lab Invest.
Volume: 96
Pages: 1165-1177
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
