2016 Fiscal Year Research-status Report
Detection of human TIM-4 on autoimmune and allergic diseases
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16K09924
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
秋葉 久弥 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60338316)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 免疫学 / アレルギー・ぜんそく / 炎症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの研究を通じて、マウス遊離型TIM-4がマクロファージやマスト細胞に結合して炎症性サイトカインの分泌を誘導し、喘息モデルマウスや関節炎モデルマウスの病態形成に関わることを明らかにしてきた。同様の現象がヒトの喘息患者やリウマチ患者でも起こっている可能性がある。本研究は、これを検証するためヒト遊離型TIM-4(hsTIM-4)の測定方法を確立して、その存在を証明し、機能を解析するとともに、喘息やリウマチ疾患の患者血清からヒト遊離型TIM-4の検出を試みて発症や病態との相関を明らかにすることを目的としている。
まず抗ヒトTIM-4抗体を作製してサンドイッチELISAによる新たなhsTIM-4検出を目指した。精製ヒトTIM-4-Ig蛋白質をマウスに免疫してリンパ節B細胞を回収、マウスミエローマ細胞と細胞融合を行った後、ヒトTIM-4に強固に結合するモノクローナル抗体を産生する融合細胞（ハイブリドーマ）を4つ得た。サンドイッチELISAを行うには最低2つの抗体がTIM-4分子の異なる領域に結合する必要があるが、得られた抗体は全てTIM-4分子の同じ領域に結合することが判明した。従って、得られた抗体の中で最も結合力が強い抗体を選び、既存のビオチン標識抗ヒトTIM-4抗体と共にhsTIM-4検出の為のサンドイッチELISAを確立した。順天堂大学医学部付属順天堂医院に掛かる喘息患者血清125サンプルからhsTIM-4を測定した結果、安静呼吸下で測定した末梢肺の気道病変(AX値)や弾性抵抗(X5値)などと有意な相関が認められた。またいくつかの異なるがん患者血清サンプルを測定した結果、Malignant Lymphoma患者が他のがん患者と比べて有意に高値を示した。hsTIM-4測定が喘息の重症度やある種のがん特異的なバイオマーカーになりうる可能性があり、現在、更なる検証を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
抗ヒトTIM-4抗体を作製してサンドイッチELISAによる新たなhsTIM-4検出方法を確立し、当初の予想通り喘息の病態とhsTIM-4値に相関が見られることから、今後サンプル数を増やして検討を続ける。
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| Strategy for Future Research Activity |
再度結合部位の異なる抗ヒトTIM-4抗体を作製し、さらに好感度のELISAを作製する。喘息患者以外にもリウマチ患者やがん患者の血清サンプルからhsTIM-4の検出を試みて疾患特異性や病態変化との相関関係の解析を行う。尚、大量のサンプル確保のために、順天堂大学医学部付属医院以外の研究機関・病院からのサンプル提供を検討する。
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| Causes of Carryover |
マウスに1回の免疫で抗TIM-4抗体が作製出来たことにより当初の予想使用額よりも抑えられた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
さらに高感度にhsTIM-4を測定するサンドイッチELISAを開発するために、再度抗TIM-4抗体を作製する費用とする。
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[Journal Article] OX40L blockade protects against inflammation-driven fibrosis.2016
Author(s)
Elhai M, Avouac J, Hoffmann-Vold AM, Ruzehaji N, Amiar O, Ruiz B, Brahiti H, Ponsoye M, Frechet M, Burgevin A, Pezet S, Sadoine J, Guilbert T, Nicco C, Akiba H, Heissmeyer V, Subramaniam A, Resnick R, Molberg O, Kahan A, Chiocchia G, Allanore Y.
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Journal Title
Proc Natl Acad Sci USA
Volume: 113
Pages: E3901-10
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Presentation] OX40L BLOCKADE PROTECTS AGAINST SKIN AND LUNG INFLAMMATION-DRIVEN FIBROSIS2016
Author(s)
M. Elhai, J. Avouac, A.-M. Hoffmann-Vold, J. Sadoine, T. Guilbert, H. Akiba, V. Heissmeyer, A. Subramaniam, R. Resnick, G. Chiocchia, Y. Allanore
Organizer
欧州リウマチ学会 EULAR 2016
Place of Presentation
London, UK
Year and Date
2016-06-08 – 2016-06-11
Int'l Joint Research
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