A new approach for the elucidation of multiple superantigens related to the trigger of Kawasaki disease

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K10072
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 鈴木 啓之 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (80196865)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 武内 崇 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (10246522) ; 末永 智浩 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (70433365) ; 垣本 信幸 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (90614412)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 川崎病 / スーパー抗原 / 遺伝子水平伝播

Outline of Annual Research Achievements

研究期間の以前からストックしていた川崎病患児の咽頭菌および研究期間3年間に入院した川崎病症例の咽頭菌について検討した。その結果、平成26年10月から平成31年2月までに川崎病診断基準を満たして当院に入院した川崎病患児130例が対象となった。入院時に咽頭ぬぐい液を採取し、液体培地(Brain-Heart Infusion Broth)を用いてovernightで増菌培養し、得られた咽頭培養液を-80°に保存した。その培養液からDNA Mini Kit (QIAGEN)を用いて全DNAを抽出し、4つのSAg遺伝子(SPE-A, SPE-C, SPE-G, SPE-J)断片についてPCRで検討した。当初は陽性率が低かったのでPCRの条件をいろいろ変更して陽性率の高い条件設定を模索した。最終的には、Tmを45℃に変更し、プライマーには25marを用いることによってSAg遺伝子断片の検出率が改善した。その結果、対象症例130例中、個々のスーパー抗原遺伝子について陽性例は、SPE-A:8例、SPE-C:14例、SPE-Gが32例、SPE-Jが5例であった。2つ以上のスーパー抗原遺伝子が検出されたのは6例で、SPE-AとSPE-Jが1例、SPE-AとSPE-Gが1例、SPE-CとSPE-Gが3例、SPE-CとSPE-GとEPE-Jの3つの遺伝子が検出されたのが1例であった。3年目の研究において、PCRで陽性反応の出た培養液を、BHI寒天培地に蒔いてコロニーを採取し、各々のコロニーのSAg遺伝子を検討した。研究期間内に純粋培養された細菌中にSPE-G遺伝子を保有する菌種を同定し、この菌種の16S rRNA遺伝子のシークエンス解析を行った結果、St.pyogenes以外のレンサ球菌Xと同定された。このレンサ球菌について更なる詳細な検討を行う予定である。

Research Products

• [Journal Article] Efficacy of primary treatment with immunoglobulin plus ciclosporin for prevention of coronary artery abnormalities in patients with Kawasaki disease predicted to be at increased risk of non-response to intravenous immunoglobulin (KAICA): a randomised controlled, open-label, blinded-endpoints, phase 3 trial (2019)
  • Author(s): Hamada H, Suzuki H, Onouchi Y, Ebata R, Terai M, Fuse S, Okajima Y, Kurotobi S, Hirai K, Soga T, Ishiguchi Y, et al.
  • Journal Title: Lancet. Volume: 393(10176): Pages: 1128-1137
  • DOI: doi: 10.1016/S0140-6736(18)32003-8.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Investigation of novel variations of ORAI1 gene and their association with Kawasaki disease. (2019)
  • Author(s): Thiha K, Mashimo Y, Suzuki H, Hamada H, Hata A, Hara T, Tanaka T, Ito K, Onouchi Y; Japan Kawasaki Disease Genome Consortium.
  • Journal Title: J Hum Genet. Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: doi: 10.1038/s10038-019-0588-2.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Identification of SAMD9L as a susceptibility locus for intravenous immunoglobulin resistance in Kawasaki disease by genome-wide association analysis. (2019)
  • Author(s): Kim JJ, Yun SW, Yu JJ, Yoon KL, Lee KY, Kil HR, Kim GB, Han MK, Song MS, Lee HD, Ha KS, Sohn S, Ebata R, Hamada H, Suzuki H, Ito K, Onouchi Y, Hong YM, Jang GY, Lee JK.
  • Journal Title: Pharmacogenomics J. Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: doi: 10.1038/s41397-019-0085-1. [Epub ahead of print]
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Patient Age and the Seasonal Pattern of Onset of Kawasaki's Disease. (2018)
  • Author(s): Kitano N, Suzuki H, Takeuchi T.
  • Journal Title: N Engl J Med. Volume: 24;378(21) Pages: 2048-2049.
  • DOI: doi: 10.1056/NEJMc1804312.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Relationship of three gene polymorphisms related to Ca2+ /NFAT-pathway with clinical characteristics in the acute phase of Kawasaki disease. (2018)
  • Author(s): Suzuki T, Kakimoto N, Onouchi Y, Suenaga T, Takeuchi T, Tachibana S, Takekoshi N, Shibuta S, Suzuki H.:
  • Organizer: The 12th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Are the serum levels of immunoglobulin G in patients with Kawasaki disease lower than those in other children? (2018)
  • Author(s): Suenaga T, Suzuki T, Kakimoto N, Takeuchi T, Suzuki H:
  • Organizer: The 12th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] The interaction between patients’ age and sex in the development of coronary artery lesions attributable with Kawasaki disease in Japan (2018)
  • Author(s): Kitano N, Takeuchi T, Suenaga T, Kakimoto N, Shibuta S, Suzuki T, Tachibana S, Takekoshi N, Suzuki H
  • Organizer: The 12th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] What role do the vasa vasorum play in the sequelae of coronary arterial lesions in Kawasaki disease? (2018)
  • Author(s): Kakimoto N, Takeuchi T, Taruya A, Ino Y, Tanaka A, Kubo T, Suzuki T, Suenaga T, Akasaka T, Suzuki H.
  • Organizer: The 12th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 当院における川崎病冠動脈病変の評価について～厚生省川崎病研究班基準（1984）とZ-scoreとの後方視的比較検討～ (2018)
  • Author(s): 鈴木崇之、垣本信幸、立花伸也、竹腰信人、渋田昌一、末永智浩、武内 崇、鈴木啓之：
  • Organizer: 第42回近畿川崎病研究会
• [Presentation] 川崎病遠隔期冠動脈病変の修復過程にVasa Vasorumはどのような役割を果たしているか？ (2018)
  • Author(s): 垣本信幸、武内 崇、樽谷 玲、猪野 靖、田中 篤、久保隆史、鈴木崇之、末永智浩、渋田昌一、赤阪隆史、鈴木啓之：
  • Organizer: 第54回小児循環器学会総会・学術集会
• [Presentation] 和歌山医大における川崎病冠動脈病変の評価について (2018)
  • Author(s): 木崇之、垣本信幸、竹腰信人、立花伸也、渋田昌一、末永智浩、武内 崇、鈴木啓之
  • Organizer: 和歌山医大における川崎病冠動脈病変の評価について
• [Presentation] 発症後2ヶ月時に冠動脈造影および光干渉断層像検査を 施行できた1例 (2018)
  • Author(s): 土橋智弥、垣本信幸、武内 崇、樽谷 玲、猪野 靖、田中 篤、久保隆史、末永智浩、 渋田昌一、赤阪隆史、鈴木啓之
  • Organizer: 第38回日本川崎病学会
• [Presentation] 川崎病罹患者の年齢と発症の季節性について (2018)
  • Author(s): 北野尚美、武内 崇、末永智浩、垣本信幸、立花伸也、竹腰信人、鈴木崇之、土橋智弥、 澁田昌一、鈴木啓之、和歌山川崎病研究会：
  • Organizer: 第38回日本川崎病学会