2018 Fiscal Year Research-status Report
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16K10444
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
辻 昭一郎 藤田医科大学, 医学部, 講師 (70726736)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉岡 篤 藤田医科大学, 医学部, 教授 (20171150)
上本 伸二 京都大学, 医学研究科, 教授 (40252449)
吉澤 淳 京都大学, 医学研究科, 助教 (60457984)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 肝移植 / マウス / 免疫寛容 / 拒絶 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウスの肝移植技術を確立するために、初めにラット間で同所肝移植を行なった。ドナー、レシピエント共にLewisラットを用い、全身麻酔下で同所肝移植を行った。門脈はカフにより、胆管はステントにより吻合を行い、肝上大静脈と肝下大静脈は共に縫合にて吻合し、肝動脈も吻合した。
次にマウスの同所肝移植を全身麻酔下で行った。本研究の移植実験ではレシピエントとして主にC57BL/6系のマウスを用い、ドナーとしてはMHCの異なるBalb/c系などのマウスを用いる予定であるが、Balb/cなどの白色系のマウスは組織が脆弱であるため、技術の確立のために初めはドナー、レシピエントともにC57BL/6を用いた。
肝上大静脈は連続縫合を行い、門脈、肝下大静脈はカフを用いて、また胆管はステントを用いて吻合した。肝動脈は原法と同じく吻合を行わなかった。マウスの肝移植は技術的に、特に肝上大静脈、門脈、肝下大静脈の吻合が極めて難しく、器具、手技の再検討などの改良を行い、C57BL/6間の同所肝移植技術を確立した。
次にドナーにBalb/cを、レシピエントにC57BL/6を用いて同様に同所肝移植を行った。Balb/cは組織が非常に脆弱で特に肝臓が容易に裂けるため技術の習得には時間を要したが、手技、道具の改善によりドナーにBalb/cを用いた場合においてもマウス肝移植の技術が確立した。
マウスは多数の近郊系の存在、遺伝情報の解読、遺伝子改変技術など研究のためのモデル動物として非常に有用で、かつ免疫学的特性からもマウスの肝移植モデルを用いた研究が望まれてきた。しかしマウス同所肝移植は技術的に極めて困難であり、世界でも数人しかその技術を保持しておらず、マウスによる肝移植研究の障害となってきた。本研究では、マウス肝移植の技術を確立したため、その意義は極めて大きく、今後の肝移植研究に大きな道を開く事となった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
マウスの肝移植は技術的に非常に困難で世界でも数人しか行うことができない。しかし我々の研究室にはマウス肝移植を行うことができる研究員がおり、マウス肝移植を用いた研究を行っていた。この度当該研究員が海外の研究室に移籍する事となり、当初は移籍した研究室と共同研究をすることになっていたが、その研究室との共同研究や研究員から研究支援を受ける事も困難となったため、マウスの肝移植の技術を再確立する必要性が生じた。
初めはラットにて肝移植技術の獲得を行い、マウスによる肝移植技術の確立を試みた。マウスの肝移植が技術的に困難であり、技術獲得に非常に時間を要したため、マウスの肝移植を前提とした実験計画にやや遅れを生じたが、困難を乗り越えて短期生存の条件下ではマウス肝移植の技術が確立されつつあった。しかし、マウス肝移植を行う研究員が右肩甲骨を骨折したため、マウス肝移植を用いた研究が8ヶ月に渡り中断されてしまった。また肩甲骨骨折からの回復後もしばらくは上肢の動きに軽度の制限があり、マウスの肝移植が行えない状態が続いた。しかし次第に実験が行えるようになり、マウス肝移植の技術を再確立した。
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| Strategy for Future Research Activity |
マウスの移植技術が再確立されたため、今後は当初の計画通り、MHCの異なったマウス間で同所肝移植を行い、免疫寛容の成立およびBAFF関連遺伝子、MHC等の発現の検討を行う。またTACIノックアウトマウスおよびBAFFトランスジェニックマウスを用いた移植実験を行い、免疫寛容および拒絶におけるTACIおよびBAFFの役割を検討する。また生体肝移植後の患者さんの肝生検標本および血清を用いて、BAFF関連遺伝子の発現および拒絶におけるその役割を研究する。
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| Causes of Carryover |
研究員の受傷により移植実験を用いた研究が止まっていたため、当初必要とされていた費用が現時点では使用されておらず、次年度使用額が生じている。
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