2017 Fiscal Year Research-status Report
膵癌における新たなリンパ節転移機序CCID formationの解明とその制御
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16K10602
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
安井 隆晴 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (60611283)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
寅田 信博 九州大学, 大学病院, 臨床検査技師 (00398075)
森山 大樹 九州大学, 大学病院, 准教授 (70586859)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 膵癌 / リンパ節転移 / CCIDformation |
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| Outline of Annual Research Achievements |
膵癌において、リンパ節転移は予後不良因子である。リンパ行転移機構として、最近Circular chemorepellent-induced defects (CCID) formation という新しい研究手法が行われている。これは、リンパ管内皮をmonolayer に培養した後、Spheroid を形成した癌細胞集団を共培養するもので癌細胞集団がリンパ管内皮を押しのけるように浸潤していく現象である。CCIDのメカニズムを解明することはリンパ節転移のメカニズムを真に理解する上で大きな進歩になると考えたため、この現象に着目して研究を開始した。これまでの検討で、ヒト膵癌細胞株・膵癌自然発生マウス由来癌細胞株を用いてCCID形成を試み、2D・3D model両方においてCCID formationをとることを顕微鏡画像により明らかにした。それぞれの細胞株によりこの浸潤形態の形成能に差を認め、癌培養上清添加実験やリンパ管新生因子として多くの報告があるVEGFC添加実験で形成能が上昇した。癌培養上清・VEGFCがCCID形成を制御している可能性が示唆された。
当該年度においては、膵癌細胞株におけるVEGFCのｍRNA発現や、膵癌細胞株上清でのVEGFC蛋白発現を検討し、CCID形成能と比較検討したところ、相関関係であることを認めた。さらにRNA干渉を行い、VEGFCをノックダウンした細胞株を使用してCCID形成能を測定すると、コントロールと比較してCCID形成能が低下したことを確認出来た。また癌培養上清添加によってリンパ管内皮細胞にどのような遺伝子変化が起こっているか検討するために、マイクロアレイを用いた検討を開始している。さらに、リンパ節転移に関わる因子を解明するために、in vivoでfootpadへの皮下移植を用いて高リンパ節転移株を作成している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
9種類の膵癌細胞株、10種類の膵癌自然発生マウス由来細胞株でのCCID形成能を測定し、2D・3D modelの両方でCCID形成が生じることを確認した。VEGFC添加実験でCCID形成能の亢進を認めている。細胞株のVEGFCのｍRNA発現、細胞株の上清でのVEGFC蛋白発現ともに、CCID形成能と相関した。RNA干渉で、VEGFCをノックダウンした細胞株でCCID形成能が低下したことを確認出来ている。
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| Strategy for Future Research Activity |
癌培養上清を添加したリンパ管内皮細胞を使用して、コントロールとの比較でのマイクロアレイによるCCID 形成能に関与する遺伝子およびマーカーの同定を進めていく。同定した因子をpass way解析などを用い、候補遺伝子を検討。その候補遺伝子overexpression またはknockdown した状態でCCID 形成能がどのように変化するかを検討する。また、これらの細胞株がspheroidを形成していないsingle cell の状態でリンパ管内皮細胞や線維芽細胞とどのように相互作用するか観察する。さらに、これらの遺伝子導入(overexpression/knockdown)細胞株をヌードマウスに移植し、リンパ節転移の形成能を検討する。
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| Causes of Carryover |
研究計画はおおむね順調に進展しており、研究資金を有効に使用できたため。
次年度は研究用試薬・器材、抗体などの消耗品、遺伝子改変マウスの作成に使用する予定である。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Degree of desmoplasia in metastatic lymph node lesions is associated with lesion size and poor prognosis in pancreatic cancer patients2017
Author(s)
Nakayama H, Ohuchida K, Yoshida M, Miyazaki T, Takesue S, Abe T, Endo S, Koikawa K, Okumura T, Moriyama T, Nakata K, Miyasaka Y, Shirahane K, Manabe T, Ohtsuka T, Toma H, Tominaga Y, Nagai E, Mizumoto K, Oda Y, Nakamura M
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Journal Title
Oncology Letters
Volume: 14
Pages: 3141～3147
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] A novel mechanism in lymphatic metastasis of pancreatic cancer2017
Author(s)
Nakayama H, Ohuchida K, Takesue S, Kibe S, Ando Y, Abe T, Endo S, Okumura T, Moriyama T, Nakata K, Miyasaka Y, Shirahane K, Tominaga Y, Ohtsuka T, Mizumoto K, Nakamura M
Organizer
The 48th Annual Meeting of The American Pancreatic Association
Int'l Joint Research
