Development of prognosis method for oral cancer prognosis with body fluid diagnosis using exosome as an index

2019 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K11722
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 村上 純 岡山大学, 歯学部, 博士研究員 (40362983)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡田 俊輔 岡山大学, 歯学部, 客員研究員 (00759681) [Withdrawn] ; 竹中 文章 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (10642522) ; 江口 傑徳 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (20457229)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 細胞外小胞 / 扁平上皮癌 / 薬剤耐性 / セツキシマブ

Outline of Annual Research Achievements

抗EGFRモノクローナル抗体であるセツキシマブは、癌細胞のEGFRと結合することで抗癌作用を示す有用な抗癌薬であるが、セツキシマブ耐性症例が報告されてい る。近年、癌細胞が放出する細胞外小胞(EV)が抗癌剤耐性に関与することが明らかとなってきたが、口腔癌の放出するEGFR含有細胞外小胞(EGFR-EV)とセツ キシマブの関連性についての報告はほとんどない。そこで、口腔癌細胞株HSC-3が放出するEGFR-EVがセツキシマブ排出に関与している可能性を考え、HSC-3が放出するEVとセツキシマブの関連性について研究を行った。
HSC-3株を培養下において播種後３日目に血清飢餓培地＋EGF添加下で培養し、その２日後、培養上清を回収しエクソソームを抽出した。同エクソソームに対し、セツキシマブを投与した（対照群は非投与）。エクソソームはそのタンパク質カーゴをBODIPYTRセラミドで染色し、蛍光標識したものを、RAWDマクロファージ由来細胞株および正常上皮細胞RT-7に培養下でその培地内に添加した。各レシピエント細胞における、様々な条件で回収したエクソソームの取り込みを蛍光顕微鏡下で比較検討した。
口腔上皮細胞株RT7およびマクロファージ由来細胞株RAWDに、セツキシマブを作用させたEGFR陽性エクソソームを投与すると、細胞内へのエクソソームの取り込みが抑制された。このことはセツキシマブが、癌周辺組織への癌細胞由来エクソソーム取り込みを阻害して抗腫瘍作用を発揮する可能性を示唆する。