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2017 Fiscal Year Annual Research Report

Activity inhibition mechanism of [NiFe] hydrogenase by oxidative modification of active site cysteine ligand

Research Project

Project/Area Number 16K17936
Research InstitutionNara Institute of Science and Technology

Principal Investigator

太 虎林  奈良先端科学技術大学院大学, 物質創成科学研究科, 特任助教 (40512554)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2018-03-31
Keywordsヒドロゲナーゼ / Ni酵素 / 酸塩基平衡 / 光活性化 / 水素
Outline of Annual Research Achievements

標準型[NiFe]ヒドロゲナーゼの光活性化されたNi-SIa状態からNi-SIr状態への戻り反応をFT-IRスペクトルにより追跡したところ、この反応の速度定数(k)はpH 8.5でpH 8.0に比べて約10倍大きくなった。得られたkをもとにln (k/T)を温度の逆数に対してプロットし、アイリングの式よりNi-SIa状態からNi-SIr状態への不活性化反応の活性化エンタルピー(ΔH‡)と活性化エントロピー(ΔS‡)を求めたところ、ΔH‡はpH 8.5(61.6 ± 1.6 kJ mol-1)とpH 8.0(59.4 ± 1.8 kJ mol-1)で有意に変化しなかったのに対し、ΔS‡はpH 8.5(約45 J mol-1 K-1)でpH 8.0(約15 J mol-1 K-1)に比べて約30 J mol-1 K-1大きくなった。以上より、pHの増大に伴うkの増大は、ΔH‡よりもΔS‡の変化に起因することが明らかになった。また、H2OとD2O溶媒中でkを比較したところ、kH/kD = 150(203 K)と非常に大きい速度論的同位体効果が検出された。これらの結果は、Ni-SIa状態からNi-SIr状態への不活性化反応において、Ni-Fe活性部位へのH2O分子の付加と脱プロトン化によりOH-架橋配位子が形成されることを示す。これらの研究成果は、[NiFe]ヒドロゲナーゼの酸塩基平衡を介した活性化・不活性化機構の理解に寄与するものである。

EPR分光法によりNAD+還元ヒドロゲナーゼのNi-Fe活性部位構造に関する情報を取得し、X線結晶構造解の結果と組み合わせて、分子内金属クラスターの酸化還元がスイッチとなって酵素活性化の構造変化を誘導していることを明らかにした。

  • Research Products

    (11 results)

All 2018 2017

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (8 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results)

  • [Journal Article] Comprehensive Reaction Mechanisms at and nearby the Ni-Fe Active Sites of [NiFe] Hydrogenases2018

    • Author(s)
      Hulin Tai, Yoshiki Higuchi, and Shun Hirota
    • Journal Title

      Dalton Transactions

      Volume: 47 Pages: 4408-4423

    • DOI

      10.1039/C7DT04910B

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Equilibrium between Inactive Ready Ni-SIr and Active Ni-SIa States of [NiFe] Hydrogenase Studied by Utilizing Ni-SIr-to-Ni-SIa Photoactivation2017

    • Author(s)
      Hulin Tai, Liang Xu, Koji Nishikawa, Yoshiki Higuchi, and Shun Hirota
    • Journal Title

      Chemical Communications

      Volume: 53 Pages: 10444-10447

    • DOI

      10.1039/c7cc06061k

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Structural Basis of the Redox Switches in the NAD+-Reducing Soluble [NiFe]-Hydrogenase2017

    • Author(s)
      Yasuhito Shomura, Midori Taketa, Hirofumi Nakashima, Hulin Tai, Hanae Nakagawa, Yoko Ikeda, Masaharu Ishii, Yasuo Igarashi, Hirofumi Nishihara, Ki-Seok. Yoon, Seiji Ogo, Shun Hirota, Yoshiki Higuchi
    • Journal Title

      Science

      Volume: 357 Pages: 928-932

    • DOI

      10.1126/science.aan4497

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] [NiFe]ヒドロゲナーゼの不活性状態Ni-SIrと活性状態Ni-SIa間の活性化・不活性化機構の解明2018

    • Author(s)
      太 虎林,許 力揚,西川幸志,樋口芳樹,廣田俊
    • Organizer
      日本化学会第98春季年会
  • [Presentation] 放線菌由来チロシナーゼの活性化機構2017

    • Author(s)
      村木美水,木原章吾,坂東尚彦,吉津裕成,黒田照夫,坂口美幸,萱間紅絵,太 虎林,廣田俊,小倉尚志,杉山政則,的場康幸
    • Organizer
      第27回金属の関与する生体関連反応シンポジウム
  • [Presentation] [NiFe]ヒドロゲナーゼの活性準備状態Ni-SIrと活性状態Ni-SIa間の酸塩基平衡機構の光照射を利用した研究2017

    • Author(s)
      太 虎林,許力揚,西川幸志,樋口芳樹,廣田 俊
    • Organizer
      第17回日本蛋白質科学会年会
  • [Presentation] 硫酸還元菌由来[NiFe]ヒドロゲナーゼの活性準備状態Ni-SIrと活性状態Ni-SIa間の酸塩基平衡機構のFT-IR研究2017

    • Author(s)
      太 虎林,許 力揚,西川幸志,樋口芳樹,廣田 俊
    • Organizer
      第44回生体分子科学討論会
  • [Presentation] 放線菌由来チロシナーゼの成熟化機構2017

    • Author(s)
      的場康幸,木原章吾,村木美水,坂東尚彦,黒田照夫,太 虎林,廣田俊,坂口美幸,小倉尚志,杉山政則
    • Organizer
      第11回バイオ関連化学シンポジウム
  • [Presentation] Elucidation of the acid-base equilibrium mechanism between the ready Ni-SIr and active Ni-SIa states of [NiFe] hydrogenase utilizing light irradiation2017

    • Author(s)
      Hulin Tai, Liyang Xu, Koji Nishikawa, Yoshiki Higuchi, and Shun Hirota
    • Organizer
      第55回日本生物物理学会年会
  • [Presentation] Elucidation of the activation/inactivation mechanism between the Ni-SIr and Ni-SIa states of [NiFe] hydrogenase utilizing Ni-SIr-to-Ni-SIa photoactivation2017

    • Author(s)
      Hulin Tai, Liyang Xu, Koji Nishikawa, Yoshiki Higuchi, and Shun Hirota
    • Organizer
      2nd International Symposium on Biofunctional Chemistry (ISBC2017)
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] S-77ヒドロゲナーゼ酸素耐性機構の構造化学2017

    • Author(s)
      松浦滉明,西川幸志,太 虎林,Noor Dina Muhd Noor,金在炫,姜志玲,尹基石,小江誠司,舘野賢,廣田俊,樋口芳樹
    • Organizer
      平成29年度日本結晶学会年会

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Published: 2018-12-17  

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