2017 Fiscal Year Annual Research Report
Study on the development of lncRNA biomarkers in radiation therapy
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16K20972
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
宮川 隆 東京大学, 医学部附属病院, 特任助教 (20721939)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 非コードRNA / 放射線治療 / 放射線 / がん / 腫瘍診断 / バイオマーカー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究はがんの放射線治療の新規メカニズムをタンパク質の鋳型とならない非コードRNA(non-coding RNA: ncRNA)をターゲットとし て明らかにすることを目的として行いました。特にncRNAの中でも機能がまだよくわかっている長塩基長ncRNA（long ncRNA:lncRNA）に焦点を当てて行いました。まず初手として、ストレスマーカータンパク質である熱ショックタンパク質発現を指標にして、適切な放射線照射条件を決定し、その線量の放射線と用いて、各種がん由来培養細胞(子宮頸がん由来のHeLa細胞、 肺がん由来のA549細胞、乳がん由来のMCF7細胞)に照射を行い、これらのがん由来細胞において発現変動をするlncRNAを定量PCRにて探索しました。その結果、放射線照射前後で発現が変化するlncRNAをいくつか同定することが出来ました。また、同様に、ウェスタンブロット法や定量PCRを用いて、転写レベルと翻訳レベルどちらにおいても発現変化するタンパク質因子もいくつか同定しました。 また、RNA FISH法と蛍光免疫染色を持ちいて、照射前後でのncRNAとタンパク質の細胞内局在変化を確認しました。その結果いくつか の局在変化を確認することが出来ました。そして同定されたncRNAとタンパク質の相互作用を確認すべく、免疫沈降法を用いたin vivo レベルでの検出とフィルター結合法を用いたin vitroレベルでの解析を、何度も条件検討を繰り返しつつ試みたものの、うまく検出できずに、結果として相互作用同定までには至りませんでした。さらなる条件検討が必要と考えます。
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