2009 Fiscal Year Annual Research Report
エピジェネティクスの制御をめざした新しいレトロウイルスベクターの開発
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17016015
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
伊庭 英夫 The University of Tokyo, 医科学研究所, 教授 (60111449)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原口 健 東京大学, 医科学研究所, 助教 (10549455)
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| Keywords | Brm / NFkappaB / SWI / SNFクロマチン構造変換因子 / miRNA / レトロウイルスベクター / RelB / requiem / 足場非依存的な増殖 |
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| Research Abstract |
最近になってコーディング遺伝子の発現制御の乱れや各種のmicroRNAの発現異常がエピジェネティカルに生じている根拠が多くのヒト癌で示されるようになった。本研究では、このようなエピジェネティカルな異常が生じる分子機構の解明を進め、その成果を集約してこれらの癌を征圧する次世代型の遺伝子治療用レトロウイルスベクターを開発することを目的としている。
我々は、SWI/SNFクロマチン構造変換因子の触媒サブユニットであるBrmとNFkappaBのサブユニットRelB/p52との両者に直接結合し、このNFkappaB分子による転写活性を特異的に活性化するアダプター分子としてRequiemタンパク質(REQ)を同定した。恒常的なRelB/p52の活性化による癌化が見られる癌細胞株Panc-1,H1299に、REQに対するshRNAベクターを導入しknockdownを行ない、発癌活性を抑制するかを検証した。その結果、shRNAを搭載したウイルスベクターを導入したこれらの細胞は、平板培養での増殖速度に影響を全く与えなかったが、軟寒天中でのコロニー形成率を5%以下にまで下げることに成功した。この結果は、REQが重要な治療標的となりうることを明確に示すと供に、Panc-1,H1299細胞では、通常の増殖に必要なRelB/p52の量は、足場非依存的な増殖に必要とされるRelB/p52量よりかなり低いことも示唆された。次にBrmのpost-transcriptional suppressionの機構として、BrmmRNAを標的とするmiRNAが特定の宿主細胞内に内在的に存在してBrmの初期転写産物を不安定化しているという作業仮説を立て実験を行なった。実際にmiR-199aの発現レトロウイルスベクター、または新規に開発したmiR-199aの活性を特異的に阻害するデコイRNA(TuD-niR199a)発現ユニットを搭蔵したレンチウイルスベクターを利用してmiR-199aが、Brmの標的となっていることを証明し、さらに多くのがん細胞型において、BrmとmiR-199aがdouble-negative feedback制御を形成していることを実証した。
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[Journal Article] Loss of the Brm-type SWI/SNF chromatin remodeling complex is a strong barrier to the Tat-independent transcriptional elongation of HIV-1 transcripts2009
Author(s)
Mizutani, T., Ishizaka, A., Tomizawa, M., Okazaki, T., Yamamichi, N., Kawana-Tachikawa, A., Iwamoto, A., Iba, H.
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Journal Title
Journal of Virology 83
Pages: 11569-11580
Peer Reviewed
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[Journal Article] LNA in situ hybridization analysis of miR-21 expression during colorectal cancer development2009
Author(s)
Yamamichi, N., Shimomura, R., Inada, K., Sakurai, K., Haraguchi, T., Ozaki, Y., Fujita, S., Mizutani, T., Furukawa, C., Fujishiro, M., Ichinose, M., Shiogama, K., Tsutsumi, Y., Omata, M., Iba, H
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Journal Title
Clinical Cancer Research 15
Pages: 4009-4016
Peer Reviewed
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[Journal Article] Cdx2 and the Brm-type SWI/SNF complex cooperatively regulate villin expression in gastrointestinal cells2009
Author(s)
Yamamichi, N., Inada, K., Furukawa, C., Sakurai, K., Tando, T., Ishizaka, A., Haraguchi, T., Mizutani, T., Fujishiro, M., Shimomura, R., Oka, M., Ichinose, M., Tsutsumi, Y., Omata, M., Iab, H.
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Journal Title
Experimental Cell Research 315
Pages: 1779-1789
Peer Reviewed
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[Presentation] Synthesis of 5'-capped sirna for suppression of off-target effects and its capability to achieve Protein expression2009
Author(s)
Ogata, A., Ueno, Y., Furukawa, C., Sakurai, K., Iba, H., Kitamura, Y., Kitade, Y.
Organizer
Joint Symposium of 5^<th> Annual Meeting of Oligonucleotide Therapeutics Society and the 19^<th> Antisense Symposium
Place of Presentation
福岡
Year and Date
2009-11-03
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[Presentation] The Brin-type SWI/SNF chromatin remodeling complex plays an important role in transcriptional elongation of HIV-1 in the absence of Tat2009
Author(s)
Ishizaka, A., Mizutani, T., Tomizawa, M., Kawana-Tachikawa, A., Iwamoto, A., Iba, H.
Organizer
The 9^<th> Awaji International Forum on Infection and Immunity
Place of Presentation
淡路島
Year and Date
2009-09-08
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