2019 Fiscal Year Annual Research Report
ハイスループット化疾患iPS病態解析による睡眠時ブラキシズムの発症メカニズム解明
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17H04395
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
馬場 一美 昭和大学, 歯学部, 教授 (80251536)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
赤松 和土 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60338184)
美島 健二 昭和大学, 歯学部, 教授 (50275343)
安部 友佳 昭和大学, 歯学部, 講師 (80614156)
松本 貴志 昭和大学, 歯学部, 助教 (00635039)
田中 準一 昭和大学, 歯学部, 講師 (40710166)
戸澤 有理恵 昭和大学, 歯学部, 兼任講師 (70783356)
菅沼 岳史 昭和大学, 歯学部, 教授 (10196694)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 睡眠時ブラキシズム / iPS細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究者らは先行研究において睡眠時ブラキシズムとセロトニン2A（5-HT2A）受容体遺伝子の一塩基多型（SNP）との関連を報告し，細胞レベルでの睡眠時ブラキシズム発症メカニズム解明を目標に睡眠時ブラキシズム患者およびコントロールより樹立したiPS細胞より5-HT2A受容体遺伝子を発現する神経細胞の誘導法を確立した．本研究ではSNPによる機能的差異の解明を目的として，iPS細胞樹立と神経分化誘導，表現型解析を目指すものである．2019年度は，睡眠ポリグラフ検査による睡眠時ブラキシズムの確定診断とSNPの遺伝子型解析により決定された睡眠時ブラキシズム患者およびコントロールのiPS細胞から，領域特異的誘導法を用いて神経細胞への誘導を行なった．HTR2Aプロモーター領域下流に蛍光タンパクZsGreenを挿入したレポーターレンチウイルスを作製し，様々な性質を有するニューロンが混在する状態からHTR2A陽性ニューロンを蛍光標識した．分化過程における遺伝子発現をqRT-PCRにて確認し，誘導された神経細胞に対し抗5-HT2A受容体抗体を用いた免疫染色による確認を行なった．可視化されたニューロンを対象としてホールセルパッチクランプを行ない，神経細胞の電気刺激への応答（電位記録モード），5-HT2A受容体選択的アゴニストであるTCB-2投与時の応答（電流記録モード）を観察した．目的とする神経細胞の測定を行なった結果，脱分極性パルスに対する連続発火が認められ，さらに，TCB-2（80μM）を投与したところ，内向き電流の発生を認めた．これによりターゲットニューロンの機能を電気生理学的に解析可能なモニタリングシステムを確立した．
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| Research Progress Status |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(10 results)
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[Presentation] Patch-clamp recordings of neurons induced from sleep bruxism patient-specific iPSC2019
Author(s)
Nakai K, Abe Y, Hoashi Y, Nakamura S, Shiga T, Avijite K S, Yasuhara R, Matsumoto T, Kotani K, Inoue T, Mishima K, Akamatsu W, Baba K
Organizer
97th General Session & Exhibition of the IADR
Int'l Joint Research
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[Presentation] Electrophysiological recordings of neurons derived from sleep bruxism patient-specific iPSCs2019
Author(s)
Nakai K, Abe Y, Shiga T, Hoashi Y, Nakamura S, Avijite K S, Yasuhara R, Matsumoto T, Kotani K, Inoue T, Mishima K, Akamatsu W, Baba K
Organizer
ISSCR 2019 Annual Meeting
Int'l Joint Research
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[Presentation] 睡眠時ブラキシズム特異的iPS細胞由来GABA作動性神経細胞の電気生理学的評価2019
Author(s)
中井健人, 安部友佳, 帆足有理恵, Avijite Kumer Sarkar, 小溪啓介, 松本貴志, 安原理佳, 美島健二, 中村史朗, 井上富雄, 志賀孝宏, 赤松和土, 馬場一美
Organizer
日本補綴歯科学会 第128回学術大会
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