2017 Fiscal Year Research-status Report
HTLV-1 Taxの新たな間歇的発現機構の解明と複合免疫療法への展開
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17K07166
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
安永 純一朗 京都大学, ウイルス・再生医科学研究所, 講師 (40362404)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | HTLV-1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒトT細胞白血病ウイルス1型（HTLV-1）は成人T細胞白血病（ATL）の原因ウイルスであり、その発がん機序にウイルス因子であるTaxとHTLV-1 bZIP factor (HBZ)が重要な役割を果たしている。ATL細胞株MT-1では、ごく一部の細胞が一過性にTaxを発現し、HBZは持続的発現パターンを呈する。今年度はTax及びHBZの病原性における意義を解析するため、Tax発現細胞とHBZ発現細胞における遺伝子発現プロファイルと表現型（細胞死、細胞周期）の解析を行った。具体的には、Tax反応性にEGFPを発現するMT-1及びKK-1（MT1GFP、KK1GFP）からTax発現細胞（EGFP陽性細胞）及びHBZ発現細胞（EGFP陰性細胞）をセルソーターにて分取し、それぞれの細胞を用いて、核酸抽出、AnnexinV/7-AAD染色による細胞死解析、DAPI染色による細胞周期解析を行った。これらの解析の結果、Tax発現細胞はHBZ発現細胞と比較してアポトーシス抵抗性を有し、細胞周期に関してはG2期からM期への進展が抑制されているという結果を得た。本所見を国際誌Proc Natl Acad Sci USAに報告した（Mahgoub M, Yasunaga JI, Iwami S, Nakaoka S, Koizumi Y, Shimura K, and Matsuoka M. Sporadic on/off switching of HTLV-1 Tax expression is crucial to maintain the whole population of virus-induced leukemic cells. Proc Natl Acad Sci USA, 2018. doi: 10.1073/pnas.1715724115）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初のH29年度の目的であった、Tax発現細胞、HBZ発現細胞間の遺伝子発現の違いと、細胞の形質の差（細胞死、細胞増殖）に関するデータが得られ、原著論文にて発表することができた。一方、Tax発現を誘導する機序に関してshRNAライブラリーを用いて関連分子のスクリーニングを行う予定であったが、遺伝子抑制の効率を上げるため、CRISPR/CAS9システムによる遺伝子ノックアウトを応用したスクリーニング系に変更した。こちらも予定通り解析を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
Tax発現を誘導する機序に関して、MT1GFP、KK1GFPを用いて、CRISPR/CAS9システムによる関連遺伝子のスクリーニングを進める。またTax誘導とワクチンによる新規治療法の開発のため、Taxを一過性に発現する細胞株を樹立し、化合物スクリーニングへの応用を目指す。
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| Causes of Carryover |
Tax発現誘導機序を解析するためにshRNAライブラリーを用いる予定であったが、遺伝子抑制の効率を上げるためにCRISPR/CAS9システムによるスクリーニング系を導入することになり、実験計画に若干の変更が生じた。スクリーニングは当初の予定通り翌年度に行う予定である。
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[Presentation] HTLV-1 Infection in Multiple Lineages of Hematopoietic Cells.2017
Author(s)
Furuta, R.,Yasunaga, JI., Miura, M., Sugata, K., Saito, A., Akari, H., Ueno, T., Takenouchi, N., Fujisawa, J., Kouh, K., Shimizu, M., Matsuda, F., Melamed, A., Bangham, CR., and Matsuoka, M
Organizer
18th Interbational Conference on Human Retrovirology HTLV and Related Viruses
Int'l Joint Research
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[Presentation] HBZ downregulates miR-455, a tumor suppressor microRNA in ATL2017
Author(s)
Ma, G., Yasunaga, JI., Miura, M., Matsumoto, T., Matsuoka, M
Organizer
第4回日本HTLV-1学会学術集会
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