2017 Fiscal Year Research-status Report
Analysis of physiological function of pc-ECV
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17K07381
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
池上 浩司 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (20399687)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 細胞外小胞 / エクソソーム / 繊毛 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウス腎臓髄質内集合管上皮由来の細胞株を用い，CRISPR/Cas9によるゲノム編集を介した複数の遺伝子破壊株を作成した。作成した遺伝子破壊株の培養上清から超遠心法により細胞外小胞を沈殿濃縮し，一次繊毛に局在するArl13b，Ift88を指標に培地中に放出されて一次繊毛由来細胞外小胞の量を解析した。解析の結果，遺伝子破壊によって一次繊毛由来細胞外小胞の放出が顕著に阻害されるものが一つ見つかった。また，遺伝子破壊によって一次繊毛由来細胞外小胞の放出が促進されるもの一つを発見した。以上の結果より，一次繊毛由来細胞外小胞の放出に強く寄与しているタンパク質と，逆に放出を抑制する分子をそれぞれ一つずつ同定することに成功した。
これらの発見は，新しい細胞間コミュニケーションツールとしての一次繊毛由来細胞外小胞の生理学的機能を解明することを目的とする本研究にとって，大きな基礎となる重要な成果である。また，本研究に限らず，一次繊毛由来細胞外小胞の放出を正と負に制御する分子が同時に発見されたことは，繊毛研究，細胞外小胞研究，これら二つの研究領域，さらには細胞生物学の研究界に大きな基礎的知見を与える点で大きな意義を持つ。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
当初計画どおり，一次繊毛由来細胞外小胞の放出に寄与する分子を特定できた。くわえて，一次繊毛由来細胞外小胞の放出を抑制する分子を同定できた点は当初計画以上の成果である。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成29年度に作出した一次繊毛由来細胞外小胞の放出が阻害される遺伝子破壊株を用いて，細胞外小胞の比較プロテオミクスを行い，一次繊毛由来細胞外小胞に含まれる，とりわけ小胞の表面に局在し抗体により認識可能なタンパク質を同定する。
一次繊毛由来細胞外小胞の放出が阻害された細胞の形態，分裂速度，接触阻害効果，移動能など，各種細胞挙動を解析し，ここに精製濃縮した一次繊毛由来細胞外小胞を投与し，それら各種細胞挙動に対する一次繊毛由来細胞外小胞の効果，すなわち生理学的機能を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
今年度はほぼ計画通りに研究費を使用した。ただし，予想外に研究が順調に進んで消耗品費などの支出が抑えられたことと，平成30年度からの新所属先（広島大学）への移動準備などで年度末に研究活動を停止したことにより，若干の次年度使用額が生じた。翌年度分（平成30年度分）の助成金と合わせた直接経費1,452,901円の使用計画はおおよそ下記のとおりである。
物品費：1,102,901円，旅費：150,000円，人件費・謝金：100,000円，その他：100,000円。研究実施場所の変更に伴い，物品費を多く計上している。
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Research Products
(8 results)
