2019 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of physiological function of pc-ECV
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17K07381
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
池上 浩司 広島大学, 医系科学研究科(医), 教授 (20399687)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 細胞外小胞 / エクソソーム / 線毛 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１）一次線毛を欠損した線維芽細胞株を，一次線毛を持つ細胞株と一次線毛を欠損した細胞株の馴化培養液，一次線毛を持つ細胞株と一次線毛を欠損した細胞株の馴化培養液から超遠心法を用いて調製した濃縮細胞外小胞溶液，でそれぞれ処理し，細胞株の挙動を検証した、その結果，一次線毛を持つ細胞株の馴化培養液，そこから濃縮した細胞外小胞溶液で処理された細胞の動きが亢進した。その際，細胞分裂に対する影響をKi67によって検証した結果，一次線毛由来小胞の有無による細胞増殖の差は認められなかった。
２）これらに加えて，サイズ排除クロマトグラフィによって細胞外小胞の分離を行い，一次線毛由来小胞とエクソソームを分離することに成功した。一次線毛を持つ細胞株の馴化培養液から一次線毛由来細胞外小胞を分離濃縮精製し，その濃縮溶液を用いて１）と同様の効果を検証することができた。さらに，上皮細胞の頂端面と基底面から放出される細胞外小胞の組成を詳しく解析した結果，エクソソームと一次線毛由来細胞外小胞を分離できることが明らかになった。この方法を用いて，一次線毛由来細胞外小胞に富む培養液を調製し１）と同様の効果を検証することができた。
３）さらに，ゲノム編集技術を用いて内在性の一次線毛タンパク質を蛍光標識した線維芽細胞の樹立に成功し，一次線毛安定蛍光化細胞株を得た。この細胞から放出された蛍光一次線毛由来細胞外小胞の標的細胞への取り込みを検証した結果，標的細胞内に多数の蛍光シグナルを検出することができ，一次線毛由来細胞外小胞が細胞に取り込まれることが確認された。
以上の成果は，線毛研究，細胞外小胞研究，これら二つの研究領域にまたがって分野横断的に細胞生物学の研究界に基礎的知見を与える点で意義を持つ。
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[Journal Article] Copy number variation in DRC1 is the major cause of primary ciliary dyskinesia in the Japanese population2020
Author(s)
Takeuchi K, Xu Y, Kitano M, Chiyonobu K, Abo M, Ikegami K, Ogawa S, Ikejiri M, Kondo M, Gotoh S, Nagao M, Fujisawa T, Nakatani K
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Journal Title
Molecular Genetics & Genomic Medicine
Volume: 8
Pages: e1137
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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