2019 Fiscal Year Research-status Report
ウイルス感染宿主因子としてのチロシンキナーゼAblの新しい役割
| Project/Area Number |
17K08656
|
|---|
| Research Institution | University of Fukui |
|---|
Principal Investigator |
定 清直 福井大学, 学術研究院医学系部門, 教授 (10273765)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
千原 一泰 福井大学, 学術研究院医学系部門, 准教授 (00314948)
竹内 健司 福井大学, 学術研究院医学系部門, 助教 (40236419)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
|
| Keywords | 感染宿主因子 / チロシンキナーゼ / C型肝炎ウイルス / ゲノム編集 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
我々はウイルスや真菌・結核菌などの病原体に対する新しい宿主因子として、チロシンキナーゼAblとSyk、さらにその関連分子であるAbl会合分子アダプタータンパク質3BP2の役割について研究を進めてきた。研究目的をより精緻に達成するために、今年度はゲノム編集（CRISPR/Cas9システム）により作成したAblを欠損する培養肝細胞（Huh7.5細胞）に、Ablの野生型と機能喪失型（Kinase-dead）をそれぞれ構成的に発現する細胞を複数樹立することに成功した。これらの細胞を用いてC型肝炎ウイルス（HCV）の感染から子ウイルス出芽までの生活環への影響について検証を行ったところ、本研究で既に明らかとなったAbl欠損細胞株におけるウイルス産生能の低下は、野生型Ablの発現により回復され、機能喪失型Ablの発現では回復されないことを明らかにした。これら一連のデータは、Ablのチロシンキナーゼとしての機能がHCVのウイルス産生能に関わることを直接的に示すものであり、本研究課題調書作成時の仮説、AblがHCVのウイルス粒子産生に関与すること（J, Biol. Chem. 2015）を強力に支持するものである。
Abl結合蛋白質であるアダプタータンパク質SH3-binding protein-2（3BP2）の役割についは、ゲノム編集により3BP2欠損マウス、変異型3BP2（Sykによるリン酸化部位に変異を加えたもの）のノックインマウスの樹立に成功した。これらのマウスを用いて、個体レベルでの免疫系細胞・組織の分化についての解析や、免疫系の細胞応答について、従来の我々の研究成果を踏まえた網羅的な解析を行った。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
昨年の報告書に記載した内容に続き、今年度はAbl欠損細胞株に再びAblタンパク質（野生型と機能喪失型）を構成的に発現する安定細胞株の樹立に成功した。またAblとの相互作用するHCV非構造蛋白質NS5Aにタグを付した組換えHCVの作成にも成功し、NS5A会合タンパク質の解析を実施した。さらにHCVのウイルス粒子産生に関わる分子への影響を解析するとともに、これらの分子の培養肝細胞における発現をRNA干渉法により低下させ、HCVの感染から子ウイルス出芽までの生活環への影響について検証を行った結果、一部の分子について明らかな差異を検出することに成功した。
3BP2については、ゲノム編集により3BP2欠損マウス、変異型3BP2（Sykによるリン酸化部位に変異を加えたY183F）のノックインマウスについて、バッククロスの過程を8回以上繰り返すことで樹立に成功した。今年度はこれら新たに作出したマウスにおける免疫細胞の分化と、免疫系の細胞応答の違いについて網羅的に解析した。その結果従来注目されていなかった新しい3BP2の役割として、C型レクチンを介する免疫応答に関与することを見出し、現在その分子メカニズムの解析を行っている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
本研究は当初予定していた研究計画に加え、Abl欠損細胞への野生型および変異型Ablを発現させた細胞の作成と、これらの細胞を用いたウイルス感染実験、さらに新規の遺伝子組み換えウイルスの作成を追加した。研究成果のとりまとめに本年度いっぱいかかる予定のため、学会誌への投稿料・印刷費、学会での成果発表については次年度に実施することとしたい。
|
| Causes of Carryover |
今後の研究の推進方策に記載した通り、研究成果のとりまとめに本年度いっぱいかかる予定のため、学会誌への投稿料・印刷費、学会での成果発表については次年度に実施することとしたい。
|
Research Products
(6 results)
