Exploring microRNA targeting calcified coronary artery lesions in chronic kidney disease

2021 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17K09563
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 赤尾 浩慶 金沢医科大学, 医学部, 准教授 (50398997)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 石灰化冠動脈病変 / 慢性腎臓病 / microRNAs / エクソソーム / 次世代シーケンサ―

Outline of Annual Research Achievements

慢性腎臓病患者の予後を規定する冠動脈硬化症に対する新たな治療戦略策定を目指し、動脈石灰化の発生と進展の機序解明を目的とする。冠動脈rotablator治療後に冠循環から体循環に流出する動脈硬化血管壁由来分子を含む血液検体を用い、in vivoのアテローム性動脈硬化に関わるエクソソーム内miRNAを同定し、治療前後の動態ならびにその機能を解し、治療法開発への発展を目指した。高感度が期待できる次世代シーケンサーを用いた解析で、前年度に引き続き慢性腎臓病患者の石灰化冠動脈に対するRotablator治療前後で採取した検体の測定を実施した。具体的には和光純薬Wako exosome Isolation kit PSを用いて血清からエクソソームを抽出し、得られたエクソソームからWako マイクロRNAエキストラクターSPキットを使用してRNAを抽出、得られたサンプルについて、ライブラリ調製をIllumina社SMARTer smRNA-Seq kitで行った。その後NextSeqによりシーケンスを実施して、得られた読み取り結果をリファレンスゲノムHuman genome hg19を選択してStrand NGS ver3.1ソフトにて解析し治療前後で変化したエクソソーム内miRNAを同定した。得られたmiRNA候補群についてIngenuity Pathway Analysisを用いたパスウエイ解析を実施したところ、Akt、TP53、NF-kBなどの因子を中心とした遺伝子パスウエイに関連するmiRNAがまとまって変動していることを示唆する結果が得られた。