2017 Fiscal Year Research-status Report
microRNAによる妊娠高血圧症候群の病態解明と遺伝子治療への応用
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17K11097
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
中嶋 康文 関西医科大学, 医学部, 教授 (70326239)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中畑 克俊 関西医科大学, 医学部, 講師 (70332971)
中山 力恒 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90568198)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 遺伝子治療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
妊産婦を対象に、胎盤、及び血液中エクソソームに発現しているsmall RNAを網羅的に解析し、妊娠高血圧症候群の早期予測,及び治療に有用なmicroRNAの存在の有無を明らかにする。また、統計解析で有用と判明したmiRNAが、ターゲットとするタンパク質を同定する事で、妊娠高血圧症候群発症の新しい機序と、その役割を探求する。さらに、妊娠高血圧に対し、miRNAによる遺伝子治療（核酸創薬）の可能性を示唆する結果を得ることを研究目的にする。
本年度は、その中で、血液細胞中（単球ーマクロファージ、好中球、血小板）のエキソソームからmicroRNA を抽出するため、超遠心法及びエクソソーム単離キットを用いて、エクソソームの分離を行い、その後、microRNA抽出を施行した。バイオアナライザーを用いて、サンプルからmicroRNA群が抽出されていることを確認後、small RNAのライブラリ作成（Ion total RNA-seq kitを用いたフラグメント化）し、cDNAに変換を行った。さらにエマルジョンPCR法を用いて、cDNAを増幅させ、シーケンシングに持ち込む。
研究結果は、サーバーにSFFまたはFASTQ形式のデータが転送し、miR Baseと照合し、網羅的解析を行う。発現定量解析には、CLCバイオ社の解析ソフト（Genomic Work Bench）を使用する。上記の発現定量結果から、周術期において多変量解析、主成分分析により有意に変化のあったmiRNAを選別する。
以上の実験手法の流れを新しい大学院生と確立することに、主な時間を使った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
正常及び妊娠高血圧症候群妊産婦を対象にした臨床研究に関して、現在やや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
正常及び妊娠高血圧症候群妊産婦を対象に、胎盤、及び血液中エクソソームからsmall RNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いてmiRNA発現の網羅的解析を行う。上記２群間の胎盤、末梢血中エクソソームのmiRNA発現変化の差を、多変量解析を用いて統計処理を行う。群間で、有意差のあるmiRNAの細胞内パスウェイ解析を行う。
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| Causes of Carryover |
正常及び妊娠高血圧症候群妊産婦を対象に、胎盤、及び血液中エクソソームからsmall RNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いてmiRNA発現の網羅的解析を行う。上記２群間の胎盤、末梢血中エクソソームのmiRNA発現変化の差を、多変量解析を用いて統計処理を行う。群間で、有意差のあるmiRNAの細胞内パスウェイ解析を行う予定である。
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[Journal Article] Potential contribution of erythrocyte microRNA to secondary erythrocytosis and thrombocytopenia in congenital heart disease.2018
Author(s)
Mukai N, Nakayama Y, Murakami S, Tanahashi T, Sessler DI, Ishii S, Ogawa S, Tokuhira N, Mizobe T, Sawa T, Nakajima Y.
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Journal Title
Pediatr Res.
Volume: 83
Pages: 866-873
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Flow-dynamics assessment of mitral-valve surgery by intraoperative vector flow mapping.2017
Author(s)
Akiyama K, Nakamura N, Itatani K, Naito Y, Kinoshita M, Shimizu M, Hamaoka S, Kato H, Yasumoto H, Nakajima Y, Mizobe T, Numata S, Yaku H, Sawa T.
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Journal Title
Interact Cardiovasc Thorac Surg.
Volume: 24
Pages: 869-875.
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Vector flow mapping analysis of left ventricular energetic performance in healthy adult volunteers.2017
Author(s)
Akiyama K, Maeda S, Matsuyama T, Kainuma A, Ishii M, Naito Y, Kinoshita M, Hamaoka S, Kato H, Nakajima Y, Nakamura N, Itatani K, Sawa T.
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Journal Title
BMC Cardiovasc Disord.
Volume: 17
Pages: 21.
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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