2017 Fiscal Year Research-status Report
A novel mechanism of endometrial cancer development involving microRNAs
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17K11280
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
浅野間 和夫 九州大学, 医学研究院, 准教授 (30380413)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 子宮体癌 / 上皮間葉移行 / マイクロRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
正常子宮内膜と子宮体癌組織におけるmicroRNA130ファミリー（MIR130A, MIR130B, MIR301A, MIR301B, MIR454）の発現をTaqManプローブ法にて調べた。MIR130A, MIR130B, MIR454は癌組織に比して正常組織で高く、MIR301A, MIR301Bは正常組織と癌組織で有意差が見られなかった。癌組織においてはMIR301A, MIR301Bが早期に比して進行期において有意に高値を示した。癌組織においてmicroRNA130ファミリーとBHLHE40とBHLHE41の発現の発現量を比較すると、MIR454以外で有意な逆相関を示した。次に細胞株を用いた解析を行った。BHLHE40とBHLHE41の両方を発現している子宮体癌細胞株HHUAにMIR301Bのmimicを遺伝子導入して強制発現させると、BHLHE40とBHLHE41のタンパク発現が低下した。MIR301Bだけでなく、MIR130A, MIR130B, MIR301Aのmimicを導入しても、BHLHE40とBHLHE41のタンパク発現は低下した。また、MIR301B のmimicをHHUA細胞に導入すると、細胞増殖が上昇し、上皮間葉移行・細胞浸潤能が上昇した。BHLHE40とBHLHE41の両方をノックダウンまたは3`UTRを持たないBHLHE40とBHLHE41を過剰発現させると、MIR301B のmimic による効果が抑制された。BHLHE40とBHLHE41の3’非翻訳領域を組み込んだルシフェラーゼレポーターを作成し、MIR301Bのmimicと共にHHUA細胞に導入するとレポーター活性が低下し、inhibitorと共に導入すると活性が上昇した。また、変異体レポーターを作成し3’非翻訳領域のMIR301Bが作用する配列領域を同定した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
子宮体癌組織検体を用いたmicroRNA130ファミリーの発現解析ならびにBHLHE40、BHLHE41の発現との相関解析を終了した。現在、細胞株を用いたin vitroの詳細な解析を実施中である。ほぼ予定通りである。
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| Strategy for Future Research Activity |
子宮体癌細胞の上皮間葉移行にmicroRNA130ファミリーによるBHLHE40、BHLHE41の発現制御がどう関与するか解析を進める。また、microRNA130ファミリー、特に近接したクラスターを形成しているMIR301B－MIR130Bのプロモーター領域の配列を解析し、その発現制御機構を解明する。In vitroの解析が終了したら、マウスを用いた in vivoの解析に移行する予定である。
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| Causes of Carryover |
理由：実験をできるだけ計画的に実施し、業績を上げることを目指したが、当初の計画と実施状況が前後している部分がある。このため、次年度使用額が生じた。
利用計画：平成30年度はまず、子宮体癌細胞株を用いた発現解析や、レポーター解析に時間・費用を充てる。TaqManプローブによるqRT-PCRやウェスタンブロットを行う。In vitroの解析が終了したら、免疫不全マウスを用いた in vivoの解析に移行する。また、子宮体癌細胞におけるMIR130 familyの標的遺伝子の検索のため、マイクロアレイ解析も行う予定である。
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