A study of liquid biopsy using exosomes for neuroblastoma and pediatric renal tumors.

2019 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17K11524
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 上原 秀一郎 日本大学, 医学部, 准教授 (00448060)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 安藤 清宏 日本大学, 医学部, 兼任講師 (10455389) ; 川島 弘之 日本大学, 医学部, 助手 (60645703) ; 越永 從道 日本大学, 医学部, 教授 (70205376)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 腎ラブドイド腫瘍 / エキソソーム / microRNA / リキッドバイオプシー / バイオマーカー

Outline of Annual Research Achievements

昨年度は、ヒト腎ラブドイド腫瘍細胞株(WT-CLS1, G401)、ヒト胎生腎由来細胞株(HEK293T)の培養上清由来エキソソームからRNAを抽出し、次世代シークエンシングによるmiRNAの網羅的発現解析を行った。本年度は、その結果として、コントロール(ヒト胎生腎細胞株)に対するヒト腎ラブドイド腫瘍細胞株におけるmiRNAの発現変動倍率を得た。腎ラブドイド腫瘍特異的miRNAの候補として、ヒト腎ラブドイド腫瘍細胞株で高発現であったmiR-214-3pに注目した。in vitroにて、各種細胞株の培養上清由来エキソソームから抽出したRNAをサンプルとし、RT-PCR法でmiR-214-3pの発現解析を行い、WT-CLS1、G401においてHEK293Tに対して有意に高発現であることを確認した。
次に、BALB/c-nu免疫不全マウスを用いて、WT-CLS1、G401の皮下腫瘍モデルマウスを作成した。腫瘍が生着したマウスから血清を採取し、ExoQuick試薬(System Biosciences社)を用いてエキソソームを抽出した。さらにそのエキソソームからRNAを抽出し、RT-PCR法でmiR-214-3pの発現解析を行った。WT-CLS1モデルマウスでは腫瘍が生着した5頭のうち3頭、G401モデルマウスでは4頭すべてでコントロールマウスに対してmiR-214-3pが有意に高発現であった。
以上より、動物実験においては腎ラブドイド腫瘍特異的miRNAの候補であるmiR-214-3pを生体試料から検出でき、微小であっても病変を検出できるマーカーになり得ることが示された。本研究は最終年度であるが、継続することによりヒトにおいても同様の結果が期待され、今後臨床的にも有用な診断指標となる可能性がある。本研究を引き続き遂行し、英文論文に投稿する予定である。