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2018 Fiscal Year Research-status Report

腫瘍内不均一性を反映する新たな薬剤感受性評価システムの構築

Research Project

Project/Area Number 17K11669
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

大山 和美  岡山大学, 歯学部, 博士研究員 (00253021)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 十川 千春  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (10253022)
江口 傑徳  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (20457229)
奥舎 有加  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (50762027)
Project Period (FY) 2017-04-01 – 2021-03-31
Keywordsがん幹細胞 / エクソソーム(細胞外小胞) / オルガノイド / 上皮間葉転換(EMT) / HSP90 / セツキシマブ / 脂質代謝 / プロテオーム
Outline of Annual Research Achievements

近年,上皮間葉転換(EMT)や腫瘍内に存在するEpCAM陽性の癌幹細胞様細胞(CIC)およびエクソソームが,薬剤耐性等の腫瘍抵抗性に関与することが示唆されている.本課題では,口腔扁平上皮癌(OSCC),去勢抵抗性前立腺がん(CRPC)および転移性大腸がん(MCRC)における腫瘍抵抗性に着目し,「腫瘍内不均一性を反映する新たな薬剤感受性評価システム構築」を進めている.H30年度は,① 転移性の異なるOSCC細胞株に由来するエクソソームのプロテオミクスを実施し,がん細胞生存因子HSP90AlphaおよびHSP90Betaを同定し,臨床検体データベース解析により予後予測バイオマーカーとしての可能性を示した. ② OSCC細胞に由来するエクソソームは,OSCC細胞のEMTを促進しただけでなく,正常口腔上皮細胞株のEMTをも誘導したため,エクソソーム中に癌化因子が含まれると考えられた.OSCCエクソソーム誘導性EMTは,抗EGFR抗体薬セツキシマブによって一部阻害できたものの,セツキシマブがOSCCエクソソームとともに分泌されるという新規薬剤耐性機構を発見した.③ OSCCとCRPCに共通の腫瘍抵抗性分子基盤として,細胞外HSP90の分泌およびEpCAMエクソソームの増加が判明した.④ 単層培養と比較し,生体内腫瘍微小環境を如実に再現しうる腫瘍オルガノイドの作製を進めている.MCRCオルガノイドでは多剤耐性遺伝子ABCG2 / BCRP発現上昇と同時に脂質排出ポンプABCG1の発現上昇を認め,ABCG1によるエクソソーム脂質排出はMCRCの抵抗性および腫瘍形成能を上昇させることが判明した.またマイクロアレイデータベース解析から,ABCG1発現上昇がCRPC,OSCC,および乳癌の予後不良と相関し,予測因子として有用である可能性を示唆した.

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

① 転移性の異なるOSCC細胞株に由来するエクソソームのプロテオーム解析の結果,がん抵抗性や転移性への関与が示唆されてきたHSP90AlphaおよびHSP90Betaを同定したことで,効率的に研究が進んだ.また,エクソソーム等の細胞外小胞には,細胞外マトリックス,膜輸送因子,癌関連因子,転写因子等も含まれることが明らかとなり,今後の解析が期待される.また,臨床検体データベース解析を駆使して,患者予後と遺伝子発現の相関解析を効率的に実施できるようになった. ② 癌エクソソーム誘導性EMTの発見により,新たな発癌機構および癌進展機構の糸口を示すことが出来た.また,今回発見した「癌エクソソームによる分子標的薬排出」現象は,今後,腫瘍免疫および薬剤耐性機構を調べる上で最重要課題であると目される.③ 癌種に限定されない共通分子基盤として細胞外HSP90およびEpCAMエクソソーム分泌に辿り着き,汎用性の高い指標を確立できた.④ H30年度は特に,腫瘍オルガノイド作製を積極的に進め,In vitroでの生体内腫瘍微小環境の再現へと一歩近づいた.分子レベルでは,長年CICマーカーとされてきたCD44に代わってCD44ヴァリアントが新規CICマーカーであることを示せた.また,多剤耐性遺伝子ABCG2と並行して発現上昇する脂質排出ポンプABCG1がエクソソーム脂質排出に関わることを独自に発見し,研究が加速している.H30年度は,本課題に関して4件の受賞に浴し,新聞掲載されたことから考えて,当初の計画以上に研究が進展したといえる.H30年度に確立したEMT制御機構,エクソソーム機能解析法,およびオルガノイド培養システムは,腫瘍内不均一性を反映する新たな薬剤感受性評価システム構築にとって,飛躍的な前進であるといえる.

Strategy for Future Research Activity

腫瘍内不均一性を反映する新たな薬剤感受性評価システム構築のためには,①腫瘍抵抗性に関わる腫瘍微小環境への深い理解,② 生体再現性が高く,高感度・高効率のレポーターシステムの発明,③ 腫瘍微小環境を高いレベルで再現したオルガノイドシステムの作製,④ 感受性・耐性試験を実施する対象薬剤の選択,の4点が必要と考えられる.①については,薬剤耐性や腫瘍抵抗性に関わる細胞として腫瘍関連マクロファージ(TAM)の役割が示唆されている.我々はOSCC細胞から分泌されたHSP90およびエクソソームがTAMに伝達され,TAMの機能を変容させる可能性を見出しており,今後これについて詳細に検討する.②については,種々の癌細胞および腫瘍微小環境を構成する細胞(マクロファージ,線維芽細胞,間葉系幹細胞,血管内皮細胞等)に,エクソソームを標識する蛍光または発光レポーターを恒常的に組み込み,汎用性が高く高感度・高効率のレポーターシステムを作製して本研究を進める.③については,①および②を踏まえてTAMを加えたオルガノイドを作製し,TAM―癌細胞間での分子・エクソソーム伝達による相互分化機構(TAMのM2/M1/M0分化の評価およびCIC特性変化)を評価する. ④については,これまでの研究成果および国内外での関連分野の状況を踏まえ,OSCCおよびMCRC治療に用いられている抗EGFR分子標的薬セツキシマブ,OSCCでも適用された免疫チェックポイント阻害剤に焦点を絞って研究を行う.

Causes of Carryover

消耗品購入予定であったが、次年度に実験遂行となったため、平成31年度物品購入予定。

  • Research Products

    (21 results)

All 2019 2018

All Journal Article (7 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 6 results) Presentation (12 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 1 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Nicotine promotes lymph node metastasis and cetuximab resistance in head and neck squamous cell carcinoma.2019

    • Author(s)
      Shimizu R, Ibaragi S, Eguchi T, Kuwajima D, Kodama S, Nishioka T, Okui T, Obata K, Takabatake K, Kawai H, Ono K, Okamoto K, Nagatsuka H, Sasaki A.
    • Journal Title

      International Journal of Oncology

      Volume: 54(1) Pages: 283-294

    • DOI

      10.3892/ijo.2018.4631

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] HSP-enriched properties of extracellular vesicles involve survival of metastatic oral cancer cells.2018

    • Author(s)
      Ono K, Eguchi T, Sogawa C, Calderwood SK, Futagawa J, Kasai T, Seno M, Okamoto K, Sasaki A, Kozaki KI.
    • Journal Title

      Journal of Cellular Biochemistry

      Volume: 119(9) Pages: 7363-7376

    • DOI

      10.1002/jcb.27039

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Anti-EGFR antibody cetuximab is secreted by oral squamous cell carcinoma and alters EGF-driven mesenchymal transition.2018

    • Author(s)
      Fujiwara T, Eguchi T, Sogawa C, Ono K, Murakami J, Ibaragi S, Asaumi JI, Okamoto K, Calderwood SK, Kozaki KI.
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      Volume: 503 Pages: 1267-1272

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2018.07.035

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Carcinogenic epithelial-mesenchymal transition initiated by oral cancer exosomes is inhibited by anti-EGFR antibody cetuximab.2018

    • Author(s)
      Fujiwara T, Eguchi T, Sogawa C, Ono K, Murakami J, Ibaragi S, Asaumi J, Calderwood SK, Okamoto K, Kozaki K.
    • Journal Title

      Oral Oncology

      Volume: 86 Pages: 251-257

    • DOI

      10.1016/j.oraloncology.2018.09.030

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Organoids with cancer stem cell-like properties secrete exosomes and HSP90 in a 3D nanoenvironment.2018

    • Author(s)
      Eguchi T, Sogawa C, Okusha Y, Uchibe K, Iinuma R, Ono K, Nakano K, Murakami J, Itoh M, Arai K, Fujiwara T, Namba Y, Murata Y, Ohyama K, Shimomura M, Okamura H, Takigawa M, Nakatsura T, Kozaki KI, Okamoto K, Calderwood SK.
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 13(2) Pages: e0191109

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0191109. eCollection 2018

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Depletion of lipid efflux pump ABCG1 triggers the intracellular accumulation of extracellular vesicles and reduces aggregation and tumorigenesis of metastatic cancer cells.2018

    • Author(s)
      Namba Y, Sogawa C, Okusha Y, Kawai H, Itagaki M, Ono K, Murakami J, Aoyama E, Ohyama K, Asaumi J, Takigawa M, Okamoto K, Calderwood SK, Kozaki K, Eguchi T.
    • Journal Title

      Frontiers in Oncology

      Volume: 8(376) Pages: 1-16

    • DOI

      10.3389/fonc.2018.00376

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] PEX domain of MMP involves proliferation, migration, and metastasis of aggressive adenocarcinoma cells.2018

    • Author(s)
      Okusha Y, Eguchi T, Sogawa C, Okui T, Nakano K, Okamoto K, Kozaki KI.
    • Journal Title

      Journal of Cellular Biochemistry

      Volume: 119(9) Pages: 7350-7362

    • DOI

      10.1002/jcb.27040

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] RASP: 難治性がんにみられるストレス抵抗性と小胞/HSP分泌特性 (RASP: Resistance-associated secretory phenotype in refractory cancer)2018

    • Author(s)
      江口傑徳
    • Organizer
      第13回 日本臨床ストレス応答学会 シンポジウム
  • [Presentation] New Approaches Revealing Novel Secretory Phenotype, Pathology, and Therapeutic Targets in Resistant / Refractory Cancer (最優秀発表賞受賞講演)2018

    • Author(s)
      Eguchi T
    • Organizer
      Brainstorming 2018 (岡山大学)
  • [Presentation] HSP-enriched properties of extracellular vesicles involve survival of metastatic oral cancer cells (細胞外小胞のHSPに富む特性は、転移性口腔癌細胞の生存を担う)2018

    • Author(s)
      Ono K, Eguchi T, Sogawa C, et al.
    • Organizer
      第77回日本癌学会学術総会 International Session "The emerging role of exosome in carcinogenesis"
  • [Presentation] オルガノイド研究の創薬応用2018

    • Author(s)
      江口傑徳
    • Organizer
      神戸再生医療勉強会(公益財団法人神戸医療産業都市推進機構クラスター推進センター)
    • Invited
  • [Presentation] エクソソームの基礎,最新知見,展望 (Basic, latest findings, and future prospects of Exosomes)2018

    • Author(s)
      江口傑徳
    • Organizer
      第35回ARCOCSセミナー
  • [Presentation] Secretion of Extracellular Vesicles with Heat Shock Proteins by Resistant Adenocarcinomas and Metastatic Oral Cancer2018

    • Author(s)
      Eguchi T, Ono K, Sogawa C, Okusha Y, et al.
    • Organizer
      Cold Spring Harbor Asia meeting for Biology of Extracellular Vesicles
  • [Presentation] Establishment of high metastatic evolved clone of adenocarcinoma cells with Mmp9 promoter-driven fluorescence reporter2018

    • Author(s)
      Sogawa C, Eguchi T, Okusha Y, Nakano K, Namba Y, Ohyama K, et al.
    • Organizer
      18th World Congress of Basic and Clinical Pharmacology (Wcp)
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 口腔扁平上皮癌診断・治療における分子シャペロンHSP90含有細胞外小胞の可能性(モリタ優秀発表賞受賞)2018

    • Author(s)
      小野喜章,江口傑徳,十川千春,奥舎有加,他
    • Organizer
      第60回 歯科基礎医学会
  • [Presentation] EGFR標的抗体薬セツキシマブによる口腔癌由来のEGFR陽性エクソソームの制御(日本口腔科学会優秀ポスター賞受賞)2018

    • Author(s)
      藤原敏史,江口傑徳,十川千春,他
    • Organizer
      第72回NPO法人日本口腔科学会学術集会
  • [Presentation] ニコチンは口腔扁平上皮癌細胞のセツキシマブ耐性を促進する2018

    • Author(s)
      清水理恵子,伊原木聰一郎,江口傑徳,他
    • Organizer
      岡山歯学会総会・学術集会 第39回
  • [Presentation] がん幹細胞特性をもつオルガノイドによるEPCAMエクソソームおよびHSP90の分泌 (Organoids with Cancer Stem Cell-like Properties Secrete EpCAM-Exosomes and H SP90 in a 3D NanoEnvironment)2018

    • Author(s)
      十川 千春,江口傑徳,小野 喜章,奥舎 有加,他
    • Organizer
      日本癌学会学術総会 第77回
  • [Presentation] 癌の治療抵抗性と転移におけるHSP90およびMMP3の役割 (Roles for HSP90 and MMP3 in tumor resistance and metastasis)2018

    • Author(s)
      江口傑徳,小野喜章,奥舎有加,十川千春,他
    • Organizer
      歯科基礎医学会 第60回
  • [Book] Regulatory Roles for Hsp70 in Cancer Incidence and Tumor Progression. In: Mario D. Galigniana (ed) Frontiers in Structural Biology, vol. 1. Role of Molecular Chaperones in Structural Folding, Biological Functions, and Drug Interactions of Client Proteins.2018

    • Author(s)
      Taka Eguchi, Benjamin J. Lang, Ayesha Murshid, Thomas Prince, Jianlin Gong and Stuart K Calderwood.
    • Total Pages
      123
    • Publisher
      Bentham Science Publishers, Sharjah, UAE.
  • [Book] Chaperones. Methods in Molecular Biology. vol. 17092018

    • Author(s)
      Toshiki Kijima, Takanori Eguchi, Len Neckers, Thomas L. Prince.
    • Total Pages
      12
    • Publisher
      Humana Press, New York, NY.

URL: 

Published: 2019-12-27  

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