2017 Fiscal Year Research-status Report
iPS細胞由来間葉系幹細胞を用いた広域顎骨組織欠損再生に向けた基礎的研究
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17K11770
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| Research Institution | Osaka Dental University |
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Principal Investigator |
橋本 典也 大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (20228430)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
馬場 俊輔 大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (40275227)
本田 義知 大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (90547259)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | iPS細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らはすでに、口腔軟組織由来iPS細胞の樹立を終え、iPS細胞由来の間葉系前駆(様)細胞への誘導も成功した。本申請では、iPS細胞からiPSMSLCのさらなる樹立効率を高める培養法を見出すとともに、iPSMSLCの安全性をゲノム異常と造腫瘍性と関連させて明らかにする。
理化学研究所バイオリソースセンターより譲渡された皮膚由来iPS細胞（409B2）を使用した。維持培養はon feeder条件にて行った。まず、409B2をmTeSR1にて3日間培養し、その後分化培地へと変更した。この際の細胞外マトリックスにはGrowth factor reduced matrigel(Corning)を使用した。分化培地はDMEM low glucose（Gibco）に10％FBS（Gibco）、10ng/mLbFGF(ReproCELL)を添加したもので、培地交換は2日毎に行い、14日間培養した。継代には、0.025％trypsinを使用し、播種はgelatin-coated plateに行った。分化はflow cytometry法にて、間葉系幹細胞のマーカー、造血幹細胞のマーカーおよび未分化マーカーの表面抗原を確認した。 さらに、安全性試験としてデジタルPCR法によってLin-28の発現を調べた。
4継代後、細胞形態は、線維芽細胞様に変化した。Flow cytometry法にて、間葉系幹細胞のマーカーであるCD73、CD29、CD44、CD90の陽性、造血幹細胞のマーカーであるCD34、CD45、および未分化マーカーであるTRA1-60、SSEA4は陰性であった。また、デジタルPCR法によって、Lin-28の発現は認められなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
皮膚由来iPS細胞から作製した間葉系幹細胞はFlow cytometry法にて、間葉系幹細胞のマーカーであるCD73、CD29、CD44、CD90の陽性、造血幹細胞のマーカーであるCD34、CD45、および未分化マーカーであるTRA1-60、SSEA4は陰性であった。このことより、本作製方法を用いて皮膚由来iPS細胞から間葉系幹細胞を作製することが可能であるから。
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| Strategy for Future Research Activity |
作製したiPS由来間葉系幹細胞から骨芽細胞へと分化させる条件を探索する。骨分化培地を用い、21日間培養し、リアルタイムPCR法とアリザリンレッド染色によって骨芽細胞分化能を評価する。
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| Causes of Carryover |
iPSでの培養期間が短く、間葉系幹細胞を作製後の培養期間が長かったため。iPS細胞の培養液ならびに間葉系幹細胞マーカーの購入に使用する。
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Research Products
(3 results)
