ワクチン抗原を分泌する組換えマレック病ウイルスを用いたワクモ防除法の開発

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18H02332
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 村田 史郎 北海道大学, 獣医学研究院, 助教 (10579163)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 今内 覚 北海道大学, 獣医学研究院, 准教授 (40396304) ; 大橋 和彦 北海道大学, 獣医学研究院, 教授 (90250498)
• Project Period (FY): 2018-04-01 – 2021-03-31
• Keywords: ワクモ / 外部寄生虫 / マレック病 / マレック病ウイルス / 組換えウイルス / 組換えワクチン / 弱毒生ワクチン / ウイルスベクター

Outline of Annual Research Achievements

日本を含め多くの国々の養鶏場において、ワクモによる被害は深刻な問題となっている。現行の薬剤による防除は、薬剤耐性ワクモの出現により効力を失い、新たな対策法が必要とされている。殺虫剤に変わる新たな手法として、ワクチンによる防除が注目されている。これまでに複数のワクチン抗原候補を同定し、その有用性の評価をこれまでに行ってきた。さらに、ワクチン接種時の負担軽減を考慮し、ワクチン抗原遺伝子を挿入したウイルスベクターの応用について、組換えマレック病弱毒生ワクチンを用いて検討を行っている。本研究では、これまでに作製したワクチン抗原遺伝子挿入組換えマレック病（MD）弱毒生ワクチンの効果増大を目指し、従来型ワクチンに改良を加え、抗原分泌型の弱毒生ワクチンの作製とその効果検証を行うことを目的とした。まず、ワクチン抗原の分泌を促進するためにMDウイルス（MDV）がコードする分泌タンパク質であるviral interleukine-8（vIL8）のシグナルペプチド（vIL8-SP）をワクチン抗原遺伝子の上流に挿入した組換えMDウイルス（MDV）を作製し、組換えMDVの再構成を行った。組換えMDVのin vitroにおける増殖性に変化は認められなかったが、組換えMDV感染細胞および培養上清における抗原の分泌を確認したところ、細胞内にのみ発現が認められた。そのため、さらなる改良を加えた感染性クローンプラスミドの作製を行った。発現量を増加させるためにCMVプロモーターをvIL8-SP上流に挿入したプラスミド、あるいはMeqプロモーターと置換したプラスミドの2種類を作製した。しかし、培養細胞に導入しウイルスの再構成を行ったところ、いずれも組換えMDVの再構成は確認されなかった。ウイルスを再構成させるためには、抗原遺伝子の挿入部位など、さらなる検討が必要である。

Research Progress Status

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Selection of reference genes for quantitative PCR analysis in poultry red mite Dermanyssus gallinae (2021)
  • Author(s): Ariizuim, T., Murata, S., Fujisawa, S., Isezaki, M., Maekawa, N., Okagawa, T., Sato, T., Oishi, E., Taneno, A., Konnai, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Journal of Veterinary Medical Science Volume: 83 Pages: 558～565
  • DOI: 10.1292/jvms.20-0677
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Characterisation of a cysteine protease from poultry red mites and its potential use as a vaccine for chickens (2021)
  • Author(s): Murata, S., Taniguchi, A., Isezaki, M., Fujisawa, S., Sakai, E., Taneno, A., Ichii, O., Ito, T., Maekawa, N., Okagawa, T., Konnai, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Parasite Volume: 28 Pages: 9
  • DOI: 10.1051/parasite/2021005
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] PD-L1 immunohistochemistry for canine cancers and clinical benefit of anti-PD-L1 antibody in dogs with pulmonary metastatic oral malignant melanoma (2021)
  • Author(s): Maekawa, N., Konnai, S., Nishimura, M., Kagawa, Y., Takagi, S., Hosoya, K., Ohta, H., Kim, S., Okagawa, T., Izumi, Y., Deguchi, T., Kato, Y., Yamamoto, S., Yamamoto, K., Toda, M., Nakajima, C., Suzuki, Y., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: npj Precision Oncology Volume: 5 Pages: 10
  • DOI: 10.1038/s41698-021-00147-6
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] The enhancement of Th1 immune response by anti-PD-L1 antibody in cattle infected with Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (2021)
  • Author(s): Sajiki, Y., Konnai, S., Nagata, R., Kawaji, S., Nakamura, H., Fujisawa, S., Okagawa, T., Mawkawa, N., Kato, Y., Suzuki, Y., Murata, S., Mori, Y., Ohashi, K.
  • Journal Title: Journal of Veterinary Medical Science Volume: 83 Pages: 162～166
  • DOI: 10.1292/jvms.20-0590
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Direct evidence of the preventive effect of milk replacer-based probiotic feeding in calves against severe diarrhea (2021)
  • Author(s): Kayasaki, F., Okagawa, T., Konnai, S., Kohara, J., Sajiki, Y., Watari, K., Ganbaatar, O., Goto, S., Nakamura, H., Shimakura, H., Minato, E., Kobayashi, A., Kubota, M., Terasaki, N., Takeda, A., Noda, H., Honma, M., Maekawa, N., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Veterinary Microbiology Volume: 254 Pages: 108976
  • DOI: 10.1016/j.vetmic.2020.108976
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Tick saliva-induced programmed death-1 and PD-ligand 1 and its related host immunosuppression (2021)
  • Author(s): Sajiki, Y., Konnai, S., Ikenaka, Y., Gulay, K. C. M., Kobayashi, A. Parizi, L. F., Joo, B. C., Watari, K., Fujisawa, S., Okagawa, T., Maekawa, N., Logullo, C.,da Silva Vaz, I.,Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 11 Pages: 1063
  • DOI: 10.1038/s41598-020-80251-y
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] A TLR7 agonist activates bovine Th1 response and exerts antiviral activity against bovine leukemia virus (2021)
  • Author(s): Sajiki, Y., Konnai, S., Okagawa, T., Maekawa, N., Nakamura, H., Kato, Y., Suzuki, Y., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Developmental & Comparative Immunology Volume: 114 Pages: 103847～103847
  • DOI: 10.1016/j.dci.2020.103847
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Molecular detection and genetic characterization of infectious laryngotracheitis virus in poultry in Myanmar (2020)
  • Author(s): Yang, Z., Murata, S., Fujisawa, S., Takehara, M., Katakura, Ken., Hmoon, M. M., Win, S. Y., Bawm, S., Konnai, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: BMC Veterinary Research Volume: 16 Pages: 453
  • DOI: 10.1186/s12917-020-02666-z
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Distinct polymorphisms in a single herpesvirus gene are capable of enhancing virulence and mediating vaccinal resistance (2020)
  • Author(s): Conradie, A. M., Bertzbach, L. D., Trimpert, J., Patria, J. N., Murata, S., Parcells M. S.,Kaufer, B. B.
  • Journal Title: PLOS Pathogens Volume: 16 Pages: e1009104
  • DOI: 10.1371/journal.ppat.1009104
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Genetic characterization of a Marek’s disease virus strain isolated in Japan (2020)
  • Author(s): Murata, S., Machida, Y., Isezaki, M., Maekawa, N., Okagawa, T., Konnai, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Virology Journal Volume: 17 Pages: 186
  • DOI: 10.1186/s12985-020-01456-1
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Detection and molecular identification of Leucocytozoon and Plasmodium species from village chickens in different areas of Myanmar (2020)
  • Author(s): Win, S. Y., Chel, H. M., Hmoon, M. M., Htun, L. L., Bawm, S., Win, M. M., Murata, S., Nonaka, N., Nakao, R., Katakura, K.
  • Journal Title: Acta Tropica Volume: 212 Pages: 105719
  • DOI: 10.1016/j.actatropica.2020.105719
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Transcriptome dynamics of blood-fed and starved poultry red mites, Dermanyssus gallinae (2020)
  • Author(s): Fujisawa, S., Murata, S., Isezaki, M., Oishi, E., Taneno, A., Maekawa, N., Okagawa, T., Konnai, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Parasitology International Volume: 78 Pages: 102156
  • DOI: 10.1016/j.parint.2020.102156
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Enhanced Immunotherapeutic Efficacy of Anti-PD-L1 Antibody in Combination with an EP4 Antagonist (2020)
  • Author(s): Sajiki, Y., Konnai, S., Cai, Z., Takada, K., Okagawa, T., Maekawa, N., Fujisawa, S., Kato, Y., Suzuki, Y., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: ImmunoHorizons Volume: 4 Pages: 837～850
  • DOI: 10.4049/immunohorizons.2000089
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The Suppression of Th1 Response by Inducing TGF-β1 From Regulatory T Cells in Bovine Mycoplasmosis (2020)
  • Author(s): Sajiki, Y., Konnai, S., Goto, S., Okagawa, T., Ohira, K., Shimakura, H., Maekawa, N., Gondaira, S., Higuchi, H., Tajima, M., Hirano, Y., Kohara, J., Murata, S., Ohashi K.
  • Journal Title: Frontiers in Veterinary Science Volume: 7 Pages: 609443
  • DOI: 10.3389/fvets.2020.609443
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] PD-L1 expression in equine malignant melanoma and functional effects of PD-L1 blockade (2020)
  • Author(s): Ganbaatar, O., Konnai, S. Okagawa, T., Nojima, Y., Maekawa, N., Minato, E., Kobayashi, A., Ando, R., Sasaki, N., Miyakoshi, D., Ichii, O., Kato, Y., Suzuki, Y., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: PLOS ONE Volume: 15 Pages: e0234218
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0234218
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Identification and functional analysis of ferritin 2 from the Taiga tick Ixodes persulcatus Schulze (2020)
  • Author(s): Githaka, N. W., Konnai, S., Isezaki, M., Goto, S., Xavier, M. A., Fujisawa, S., Yamada, S., Okagawa, T., Maekawa, N., Logullo, C., da Silva Vaz, I., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Ticks and Tick-borne Diseases Volume: 11 Pages: 101547～101547
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2020.101547
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression Analysis of Canine CMTM6 and CMTM4 as Potential Regulators of the PD-L1 Protein in Canine Cancers (2020)
  • Author(s): Takeuchi, H., Konnai, S., Maekawa, N., Minato, E., Ichikawa, Y., Kobayashi, A., Okagawa, T., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Frontiers in Veterinary Science Volume: 7 Pages: 330
  • DOI: 10.3389/fvets.2020.00330
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Upregulation of PD-L1 Expression by Prostaglandin E2 and the Enhancement of IFN-γ by Anti-PD-L1 Antibody Combined With a COX-2 Inhibitor in Mycoplasma bovis Infection (2020)
  • Author(s): Goto, S., Konnai, S., Hirano, Y., Kohara, J., Okagawa, T., Maekawa, N., Sajiki, Y., Watari, K., Minato, E., Kobayashi, A., Gondaira, S., Higuchi, H., Koiwa, M., Tajima, M., Taguchi, E., Uemura, R., Yamada, S., Kaneko, M. K., Kato, Y., Yamamoto, K., Toda, M., Suzuki, Y., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Frontiers in Veterinary Science Volume: 7 Pages: 12
  • DOI: 10.3389/fvets.2020.00012
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Immunosuppressive effects of sialostatin L1 and L2 isolated from the taiga tick Ixodes persulcatus Schulze (2020)
  • Author(s): Sajiki, Y., Konnai, S., Ochi, A., Okagawa, T., Githaka, N., Isezaki, M., Yamada, S., Ito, T., Ando, S., Kawabata, H., Logullo, C., da Silva Vaz, I., Maekawa, N., Murata, S., Ohashi, K.
  • Journal Title: Ticks and Tick-borne Diseases Volume: 11 Pages: 101332～101332
  • DOI: 10.1016/j.ttbdis.2019.101332
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 牛白血病ウイルス感染症における免疫抑制受容体TIM-3の発現解析および機能解析 (2020)
  • Author(s): 中村 隼人, 今内 覚, 岡川 朋弘, 佐治木 大和, 渡 慧, 神谷 可菜, 齋藤 麻矢, 前川 直也, 村田 史郎, 大橋 和彦
  • Organizer: 第163回日本獣医学会学術集会
• [Presentation] ネコCytotoxic T-lymphocyte antigen-4 (CTLA-4) を標的とした新規免疫抑制製剤の開発における基礎的検討 (2020)
  • Author(s): 大塚 拓海, 今内 覚, 前川 直也, 渡 慧, 岡川 朋弘, 村田 史郎, 大橋 和彦
  • Organizer: 第163回日本獣医学会学術集会
• [Presentation] ワクモにおける定量的PCR法確立のための内在性コントロール遺伝子の探索 (2020)
  • Author(s): 有泉 拓馬, 村田 史郎, 藤澤 宗太郎, 伊勢崎 政美, 前川 直也, 岡川 朋弘, 種子野 章, 大石 英司, 今内 覚, 大橋 和彦
  • Organizer: 第163回日本獣医学会学術集会
• [Remarks] 北海道大学大学院獣医学研究院 感染症学教室ホームページ
  • URL: https://lab-inf.vetmed.hokudai.ac.jp