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2020 Fiscal Year Annual Research Report

新世代中性子構造生物学の開拓

Research Project

Project/Area Number 18H05229
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

杉山 正明  京都大学, 複合原子力科学研究所, 教授 (10253395)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 中川 洋  国立研究開発法人日本原子力研究開発機構, 原子力科学研究部門 原子力科学研究所 物質科学研究センター, 研究主幹 (20379598)
矢木 真穂  大学共同利用機関法人自然科学研究機構(新分野創成センター、アストロバイオロジーセンター、生命創成探究, 生命創成探究センター, 助教 (40608999)
佐藤 衛  横浜市立大学, 生命医科学研究科, 教授 (60170784)
齋尾 智英  北海道大学, 理学研究院, 助教 (80740802)
苙口 友隆  慶應義塾大学, 理工学部(矢上), 講師 (90589821)
富永 大輝  一般財団法人総合科学研究機構(総合科学研究センター(総合科学研究室)及び中性子科学センター(研究開発, 中性子科学センター, 研究員 (50513694)
井上 倫太郎  京都大学, 複合原子力科学研究所, 准教授 (80563840)
Project Period (FY) 2018-06-11 – 2023-03-31
Keywords階層関連ダイナミクス / 中性子溶液散乱 / タンパク質重水素化 / 計算機連携解析
Outline of Annual Research Achievements

本課題では、蛋白質科学の未踏領域である時間領域ピコ秒―マイクロ秒、および空間スケールピコメータ-マイクロメータに存在する階層間連携ダイナミクスを明らかにするため、蛋白質の構造・ダイナミクスを可視化する試料・測定・解析の手法を開発し、実際の系に適応することで新たな生命科学を開拓することを目指している。
具体的には、ドメイン運動を可視化するのに適した【試料調製技術開発】、調製された試料の特長を生かした中性子散乱法と他の測定法を統合的に用いた【測定技術開発】、得られた測定データを計算機シミュレーションにより解析する【解析法開発】を行っている。
令和2年度は、コロナ禍の影響もあり、大型施設での共同実験は最低限の実施に絞ったが、各研究グループの研究室内で実施できる研究の充実と論文発表を重点に行い、以下の成果が得られた。【試料調製技術開発】蛋白質重水素化については、これまでの成果を基にしたマニュアルの充実(ソフトウェアの追加など:研究グループのHPで公開)とともに、論文発表を行った。ドメインライゲーションの開発では、Tri-Ubの大量培養システムの構築に加えて、世界で初めてHef、ER60のドメインライゲーションに成功した。【測定技術開発】J-PARCにおいてHefのダイナミクスの温度依存性の測定を行った。この際に従来の測定セルでは温度耐性が低いことが判明したので新規セルの開発も行った。【解析法開発】従来の全原子分子動力学シミュレーション法に加えて、広い位相空間の探索を得意とする粗視化分子動力学シミュレーション法を用いた解析手法の開発を行い、小胞体内蛋白質ER60の内部運動の解明に成功した

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

令和2年度はコロナ禍の影響で、研究室閉鎖や海外施設での実験禁止・国内の移動の制限(国内大型施設での実験制限)があり、異なった大学・研究施設に所属する研究グループが連携して研究を進めている本研究課題にとっては困難な状況であった。そこで、この状況に対応すべく「TV会議を活用した研究会議の活性化」「成果の論文化」「所属施設での研究の充実」「国内施設での実験は施設グループがメールインで担当する」方針で進めることにより、これまで通りの研究レベルを維持できたと考えている。具体的には、酵素を用いたマルチドメインのライゲーションの成功は、分野を超えたインパクトのある成果であると考えている。また、J-PARCの中性子準弾性散乱装置を用いた「Hefの内部運動の温度依存性の測定」では大変興味深い成果を得ている。また、上述の通り計算機解析手法もグループに加わった博士研究員により粗視化分子動力学法を取り込んだ新たな解析法の開発が進んだ(一部はER60の溶液ダイナミクスとして発表した)。 以上より、コロナ禍により当初企図していた内容で実施できない項目(海外施設を用いた実験)もあったが、その分を十分に補う進展があったといえるので、全体として「おおむね順調に進展している」とした。

Strategy for Future Research Activity

研究ターゲットタンパク質であるHef, Tri-Ub, MurD, ER60の試料調製技術の開発(蛋白質制御重水素化法・マルチドメインライゲーション法・大量調製法)は、これまで予定以上に進行しているので、このまま各グループで順調に進めていき、散乱実験時に十分な品質・量を供給できる体制を整える。溶液構造・ダイナミクス測定に関してはJ-PARCを用いた中性子準弾性散乱測定は新規セル・測定条件検討もほぼ終了したので、上述の試料の充実に合わせ種々の条件での測定を進める。中性子小角散乱・スピンエコー測定は海外施設での実験の実施は現時点では見込めない。そこで国内にて再起動した研究炉(JRR-3)の実験利用再開に合わせて、実験体制を構築して実施する。解析手法はこれまで通り苙口グループによる全原子分子動力学法等による構造解析手法開発に加え、杉山グループでの粗視化分子動力学法を基軸とした解析手法開発も併せて進める。
また、これまで通り研究成果の学会発表・論文発表に加え、シンポジウム・ワークショップの開催も積極的に進め、他手法との交流も行う。

  • Research Products

    (33 results)

All 2021 2020 Other

All Journal Article (17 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Peer Reviewed: 17 results,  Open Access: 13 results) Presentation (13 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Invited: 12 results) Book (2 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Quartz Cell for a Backscattering Spectrometer2021

    • Author(s)
      Tominaga Taiki、Kawakita Yukinobu、Nakagawa Hiroshi、Yamada Takeshi、Shibata Kaoru
    • Journal Title

      JPS Conference Proceedings

      Volume: 33 Pages: -

    • DOI

      10.7566/JPSCP.33.011086

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Corrosion of Aluminum-based Containers for Neutron Studies with Aqueous Samples under Low Temperatures2021

    • Author(s)
      Tominaga Taiki、Sahara Masae、Kawakita Yukinobu、Nakagawa Hiroshi、Shimamoto Naonobu
    • Journal Title

      JPS Conference Proceedings

      Volume: 33 Pages: -

    • DOI

      10.7566/JPSCP.33.011094

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Solution structure of multi-domain protein ER-60 studied by aggregation-free SAXS and coarse-grained-MD simulation2021

    • Author(s)
      Okuda Aya、Shimizu Masahiro、Morishima Ken、Inoue Rintaro、Sato Nobuhiro、Urade Reiko、Sugiyama Masaaki
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 11 Pages: 5655

    • DOI

      10.1038/s41598-021-85219-0

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Deuteration Aiming for Neutron Scattering2021

    • Author(s)
      Okuda Aya、Inoue Rintaro、Morishima Ken、Saio Tomohide、Yunoki Yasuhiro、Yagi-Utsumi Maho、Yagi Hirokazu、Shimizu Masahiro、Sato Nobuhiro、Urade Reiko、Kato Koichi、Sugiyama Masaaki
    • Journal Title

      Biophysics and Physicobiology

      Volume: 18 Pages: 16~27

    • DOI

      10.2142/biophysico.bppb-v18.003

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Histone variant H2A.B-H2B dimers are spontaneously exchanged with canonical H2A-H2B in the nucleosome2021

    • Author(s)
      Hirano Rina、Arimura Yasuhiro、Kujirai Tomoya、Shibata Mikihiro、Okuda Aya、Morishima Ken、Inoue Rintaro、Sugiyama Masaaki、Kurumizaka Hitoshi
    • Journal Title

      Communications Biology

      Volume: 4 Pages: 191

    • DOI

      10.1038/s42003-021-01707-z

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Elucidation of the mechanism of subunit exchange in αB crystallin oligomers2021

    • Author(s)
      Inoue Rintaro、Sakamaki Yusuke、Takata Takumi、Wood Kathleen、Morishima Ken、Sato Nobuhiro、Okuda Aya、Shimizu Masahiro、Urade Reiko、Fujii Noriko、Sugiyama Masaaki
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 11 Pages: 2555

    • DOI

      10.1038/s41598-021-82250-z

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Functional cooperativity between the trigger factor chaperone and the ClpXP proteolytic complex2021

    • Author(s)
      Rizzolo Kamran、Yu Angela Yeou Hsiung、Ologbenla Adedeji、Kim Sa-Rang、Zhu Haojie、Ishimori Koichiro、Thibault Guillaume、Leung Elisa、Zhang Yi Wen、Teng Mona、Haniszewski Marta、Miah Noha、Phanse Sadhna、Minic Zoran、Lee Sukyeong、Caballero Julio Diaz、Babu Mohan、Tsai Francis T. F.、Saio Tomohide、Houry Walid A.
    • Journal Title

      Nature Communications

      Volume: 12 Pages: 281

    • DOI

      10.1038/s41467-020-20553-x

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Position Dependency of the Scattered Intensity in the Time-of-flight Backscattering Spectrometer DNA2021

    • Author(s)
      Matsuura Masato、Yamada Takeshi、Tominaga Taiki、Kobayashi Makoto、Nakagawa Hiroshi、Kawakita Yukinobu
    • Journal Title

      JPS Conference Proceedings

      Volume: 33 Pages: 011068

    • DOI

      10.7566/JPSCP.33.011068

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Dynamics of proteins with different molecular structures under solution condition2020

    • Author(s)
      Inoue Rintaro、Oda Takashi、Nakagawa Hiroshi、Tominaga Taiki、Saio Tomohide、Kawakita Yukinobu、Shimizu Masahiro、Okuda Aya、Morishima Ken、Sato Nobuhiro、Urade Reiko、Sato Mamoru、Sugiyama Masaaki
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 10 Pages: 21678

    • DOI

      10.1038/s41598-020-78311-4

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] NMR Characterization of Conformational Interconversions of Lys48-Linked Ubiquitin Chains2020

    • Author(s)
      Hiranyakorn Methanee、Yanaka Saeko、Satoh Tadashi、Wilasri Thunchanok、Jityuti Benchawan、Yagi-Utsumi Maho、Kato Koichi
    • Journal Title

      International Journal of Molecular Sciences

      Volume: 21 Pages: 5351~5351

    • DOI

      10.3390/ijms21155351

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] PV1 Protein from Plasmodium falciparum Exhibits Chaperone-Like Functions and Cooperates with Hsp100s2020

    • Author(s)
      Hakamada Kazuaki、Nakamura Manami、Midorikawa Rio、Shinohara Kyosuke、Noguchi Keiichi、Nagaoka Hikaru、Takashima Eizo、Morishima Ken、Inoue Rintaro、Sugiyama Masaaki、Kawamoto Akihiro、Yohda Masafumi
    • Journal Title

      International Journal of Molecular Sciences

      Volume: 21 Pages: 8616~8616

    • DOI

      10.3390/ijms21228616

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Integral approach to biomacromolecular structure by analytical-ultracentrifugation and small-angle scattering2020

    • Author(s)
      Morishima Ken、Okuda Aya、Inoue Rintaro、Sato Nobuhiro、Miyamoto Yosuke、Urade Reiko、Yagi-Utsumi Maho、Kato Koichi、Hirano Rina、Kujirai Tomoya、Kurumizaka Hitoshi、Sugiyama Masaaki
    • Journal Title

      Communications Biology

      Volume: 3 Pages: 294

    • DOI

      10.1038/s42003-020-1011-4

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Asp isomerization increases aggregation of α-crystallin and decreases its chaperone activity in human lens of various ages2020

    • Author(s)
      Fujii Noriko、Takata Takumi、Kim Ingu、Morishima Ken、Inoue Rintaro、Magami Kousuke、Matsubara Toshiya、Sugiyama Masaaki、Koide Tamaki
    • Journal Title

      Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics

      Volume: 1868 Pages: 140446~140446

    • DOI

      10.1016/j.bbapap.2020.140446

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A novel soybean protein disulphide isomerase family protein possesses dithiol oxidation activity: identification and characterization of GmPDIL62020

    • Author(s)
      Okuda Aya、Matsusaki Motonori、Masuda Taro、Morishima Ken、Sato Nobuhiro、Inoue Rintaro、Sugiyama Masaaki、Urade Reiko
    • Journal Title

      The Journal of Biochemistry

      Volume: 168 Pages: 393~405

    • DOI

      10.1093/jb/mvaa058

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Biological phase separation: cell biology meets biophysics2020

    • Author(s)
      Yoshizawa Takuya、Nozawa Ryu-Suke、Jia Tony Z.、Saio Tomohide、Mori Eiichiro
    • Journal Title

      Biophysical Reviews

      Volume: 12 Pages: 519~539

    • DOI

      10.1007/s12551-020-00680-x

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Distance Distribution between Two Iodine Atoms Derived from Small-Angle X-ray Scattering Interferometry for Analyzing a Conformational Ensemble of Heavy Atom-Labeled Small Molecules2020

    • Author(s)
      Taguchi Yuya、Saio Tomohide、Kohda Daisuke
    • Journal Title

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      Volume: 11 Pages: 5451~5456

    • DOI

      10.1021/acs.jpclett.0c01107

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Assessment of Force Field Accuracy Using Cryogenic Electron Microscopy Data of Hyper-thermostable Glutamate Dehydrogenase2020

    • Author(s)
      Oroguchi Tomotaka、Oide Mao、Wakabayashi Taiki、Nakasako Masayoshi
    • Journal Title

      The Journal of Physical Chemistry B

      Volume: 124 Pages: 8479~8494

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.0c04464

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 溶液中の生体高分子の構造解析 ー溶液散乱を中心とした統合的アプローチー2021

    • Author(s)
      杉山正明
    • Organizer
      自然共生高分子セミナー(5)
    • Invited
  • [Presentation] Mechanistic insights into a molecular chaperone in protein folding and degradation2021

    • Author(s)
      Tomohide Saio
    • Organizer
      2021 virtual Cold Spring Harbor Asia Conference
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Observation of protein dynamics with solution scattering2020

    • Author(s)
      Masaaki Sugiyama
    • Organizer
      第 58 回日本生物物理学会年会
    • Invited
  • [Presentation] システム内の分子動態を溶液散乱で探る~DA-SANS からBC-SANS を目指して~2020

    • Author(s)
      杉山正明
    • Organizer
      令和2年度BINS公開シンポジウム
    • Invited
  • [Presentation] コントラスト変調小角中性子散乱によるタンパク質複合体の解離会合現象の可視化2020

    • Author(s)
      井上倫太郎
    • Organizer
      CBI学会2020
    • Invited
  • [Presentation] 中性子散乱解析を目指したタンパク質ライゲーションの技術戦略2020

    • Author(s)
      奥田 綾, 清水 将裕, 守島 健, 佐藤 信浩, 井上 倫太郎, 裏出 令子, 杉山 正明
    • Organizer
      第20回日本中性子科学会年会
    • Invited
  • [Presentation] 準弾性中性子散乱による溶液中におけるタンパク質の内部運動解析にむけて2020

    • Author(s)
      井上 倫太郎, 杉山 正明
    • Organizer
      第20回日本中性子科学会年会
    • Invited
  • [Presentation] 量子ビーム散乱法と分子シミュレーションによるマルチドメイン蛋白質の溶液動態解析2020

    • Author(s)
      中川洋
    • Organizer
      第20回日本中性子科学会年会
    • Invited
  • [Presentation] シャペロンから理解する細胞内タンパク質の動態制御メカニズム2020

    • Author(s)
      齋尾 智英
    • Organizer
      第93回日本生化学会
    • Invited
  • [Presentation] Exploiting paramagnetic metal ions for protein structural study in solution2020

    • Author(s)
      齋尾 智英, 石森 浩一郎
    • Organizer
      第 58 回日本生物物理学会年会
    • Invited
  • [Presentation] 常磁性金属と分子シャペロン2020

    • Author(s)
      齋尾 智英
    • Organizer
      2020年度日本分光学会NMR分光部会 集中講義
    • Invited
  • [Presentation] On and off between molecular chaperones and clients: Appropriate distance and timing for protein folding2020

    • Author(s)
      Tomohide Saio
    • Organizer
      21st Hokudai-RIES International Symposium
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] 蛋白質の階層構造ダイナミクスの解明2020

    • Author(s)
      中川洋、井上倫太郎、小田隆、矢木-内海真穂、斉尾智英、苙口友隆、長田裕也、杉山正明、佐藤衛、川北至信、岩瀬裕希、富永大輝、高田慎一
    • Organizer
      量子ビームサイエンスフェスタ
  • [Book] 「溶液散乱法Ⅰ:静的構造解析」相分離生物学の全貌(現代化学増刊46)2020

    • Author(s)
      杉山正明 (編) 白木 賢太郎
    • Total Pages
      400
    • Publisher
      東京化学同人
    • ISBN
      978-4-8079-1346-6
  • [Book] 「溶液散乱法Ⅱ:動的構造を中心に」相分離生物学の全貌(現代化学増刊46)2020

    • Author(s)
      井上倫太郎 (編)白木 賢太郎
    • Total Pages
      400
    • Publisher
      東京化学同人
    • ISBN
      978-4-8079-1346-6
  • [Remarks] 新世代中性子構造生物学の開拓

    • URL

      http://www.rri.kyoto-u.ac.jp/NSBNG/

URL: 

Published: 2021-12-27  

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