2019 Fiscal Year Research-status Report
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18K05356
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
樺山 一哉 大阪大学, 理学研究科, 准教授 (00399974)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | HaloTag / ヘマグルチニン / 合成糖鎖 / インフルエンザウイルス / シアル酸 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
R1年度は、糖鎖を提示するための細胞の作製とその評価を行った。細胞は共同研究者より提供された複合型N-グリカン構造を持たないHeLa Mgat1 KO細胞を用いた。この細胞にHaloTag融合トランスフェリン受容体の発現遺伝子を導入し、安定発現株を作製した。HaloTagが機能することを確認するために、TMRリガンドを添加したところ、細胞膜が染色されることを確認した。続いて、所属研究室にて合成が完了している、末端にハロアルカンを持つ複数の蛍光修飾糖鎖リガンドを６種類用いて、それぞれ結合確認を行った所、問題なく細胞膜でのリガンド結合による蛍光が確認できた。そこで上記リガンドのうち、bisecting GlcNAc 糖鎖型のものについて、高親和性を有するPHA-E4レクチンとの相互作用を評価したところ、糖鎖特異的なレクチン結合が確認された。以上より、生細胞における合成糖鎖提示システムの構築に成功した。続いてこのシステムを用いて、シアル酸とヘマグルチニンの結合を確認した。具体的には、Influenza A H1N1 (A/WSN/33) およびInfluenza A H5N1 (A/Vietnam/1194/2004)を購入し、HeLa細胞のHaloTag融合GPIアンカー型タンパク質を一過性発現株において、それぞれのヘマグルチニンに結合する合成糖鎖リガンドを付加し、結合能を確認した。現在の所、HeLa親株に発現する糖鎖の影響により、特異的結合が確認しづらい状況であるため、発現させる細胞株を選定中である。人工細胞においてもDOPC、DPPC、コレステロールの3成分系に蛍光糖脂質プローブを追加し、相分離リポソームの構築および分離の可視化に成功している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
H31(R1)年度の研究計画である人工細胞における脂質ラフトの再構築には成功しており、合成糖鎖提示細胞においてもインフルエンザウイルス感染に必要なヘマグルチニンの結合を確認できているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
H31(R1)年度は概ね研究計画に沿って実験を進行したが、本研究から発展したHaloTag技術を用いた合成糖鎖提示細胞の構築と、シアル酸構造の異なる２つの糖鎖リガンド（それぞれヒトインフルエンザ、鳥インフルエンザに結合する構造を有する）の合成に成功したことは、本研究を最も推進させる要因となった。そこで相分離リポソームに加えて、合成糖鎖提示細胞でのこのシアル酸構造の異なる２つの糖鎖リガンドを用いてヘマグルチニン(HA)との結合を検証していく。
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[Journal Article] The Core Fucose on an IgG Antibody is an Endogenous Ligand of Dectin‐12019
Author(s)
Manabe Y., Marchetti R., Takakura Y., Nagasaki M., Nihei W., Takebe T., Tanaka K., Kabayama K., Chiodo F., Hanashima S., Kamada Y., Miyoshi E., Dulal HP., Yamaguchi Y., Adachi Y., Ohno N., Tanaka H., Silipo A., Fukase K., Molinaro A.
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Journal Title
Angewandte Chemie International Edition
Volume: 58
Pages: 18697～18702
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Synthesis And Immunological Evaluation of Self-adjuvanting Anticancer Vaccine Candidate2019
Author(s)
Manabe Y., Chang TC., Feng Q., Fujimoto Y., Ohshima S., Kametani Y., Kabayama K., Nimura Y., Lin, CC., Fukase K.
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Journal Title
Peptide Science 2018
Volume: x
Pages: x
Peer Reviewed
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[Presentation] Development of Alpha-Gal Conjugated Anti-Cancer Antibodies2019
Author(s)
Fukase K., Sianturi J., Manabe Y., Li HS., Chiu LT., Chang TC., Tokunaga K., Kabayama K., Tanemura M., Takamatsu S., Miyoshi E., Hung SC.
Organizer
Eurocarb 2019
Int'l Joint Research
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[Presentation] Activities of the Consortium for Medicine, Chemistry, and Physics at Osaka University2019
Author(s)
Kabayama K., Kaneda K., Shinohara A., Shirakami Y., Watabe T., Zhang ZJ., Toyoshima A., Yoshimura T., Manabe Y., Shimoyama A., Fukase K.
Organizer
TAT-11
Int'l Joint Research
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