2020 Fiscal Year Annual Research Report
Exploration and functional analysis of novel RNA-interfering nucleic acids.
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18K07048
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| Research Institution | Tokyo Medical University |
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Principal Investigator |
大野 慎一郎 東京医科大学, 医学部, 講師 (90513680)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
熊谷 勝義 東京医科大学, 医学部, 助教 (20567911)
黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 主任教授 (80251304)
原田 裕一郎 東京医科大学, 医学部, 助手 (80570168)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | RNA干渉 / miRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
応募者が開発した短縮型mimic miRNAは、RNA干渉を誘導する無修飾核酸として最短であり、in vivoおよびin vitroの実験から免疫応答を誘導しにくい特徴を有する。一方で、このような短いヘアピン構造のＲＮＡに、ＲＮＡ干渉活性があるという報告はなく、仮に生体内で類似の構造をとるノンコーディングＲＮＡが存在するのであれば、新規のＲＮＡ干渉核酸として機能していることが予想されたことから、本研究では生体内に存在する短鎖ヘアピンRNAの探索および機能解析を目的とした。はじめに、細胞からRNAを抽出し短鎖ＲＮＡの次世代シーケンスを行った。その中から３０塩基前後の配列情報を抽出し、ＲＮＡ二次構造予測アルゴリズム（Centroid Fold）により、ヘアピン構造をとるghRNA様二次構造の短鎖ノンコーディングRNAを同定した。同定した内在性ghRNAのRNA干渉活性を調べるために、人工的に合成した内在性ghRNAを細胞へ導入し、マイクロアレイによりmRNAの発現変動の解析を行った。結果、内在性ghRNAの導入により、発現が抑制されるmRNAが多数同定された。また、その結果は、Real-time PCR法により再確認された。同定した内在性のghRNAのRNA干渉活性は、ルシフェラーゼ遺伝子を用いたレポーターアッセイで検証した。内在性ghRNAの相補配列をルシフェラーゼ遺伝子の３‘ＵＴＲに連結し、合成ghRNAをトランスフェクションした際のRNA干渉を発光抑制により検出した。内在性ghRNAが制御する遺伝子の中には、がん等の疾患に関与する遺伝子もあり、新規RNA干渉機構であるghRNAの疾患への関与が示唆された。以上の成果は、第１０7～１０９回日本病理学会および第７７～７９回日本癌学会にて発表を行った。
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Research Products
(3 results)
